益腎化瘀方對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、　　背景：腎小管間質(zhì)纖維化(renal tubuleinterstitial fibrosis,RIF)是各種原因引起的慢性腎臟病(chronic kidney disease,CKD)的共同通路和主要病理特征,腎間質(zhì)纖維化是由于細(xì)胞外基質(zhì)(extracelluar matirx,ECM)合成增加和降解減少的綜合結(jié)果。肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast, MyoF)是腎間質(zhì)中產(chǎn)生ECM的主要細(xì)胞。最新研究認(rèn)為,腎小管上皮細(xì)胞在病理

2、刺激下可發(fā)生上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(epithelial to mesenchymal transdifferentiation, EMT),喪失原有的細(xì)胞表型特征,表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA),呈現(xiàn) MyoF 的特征表型,成為腎間質(zhì)MyoF的主要來源。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是TEMT的主要誘導(dǎo)因子,可單獨(dú)或通過其致腎纖維化作用的下游因子促使 TEMT的

3、發(fā)生。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)研究益腎化瘀方對(duì) TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)分化的作用,以及對(duì)α-SMA、TGF-β1和纖維化抑制性因子Smad7表達(dá)的影響,探討益腎化瘀方對(duì)腎間質(zhì)纖維化防治作用的可能機(jī)制,為臨床上應(yīng)用益腎化瘀方防治腎間質(zhì)纖維化提供理論依據(jù)。
　　方法：將體外培養(yǎng)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)以纈沙坦(代文)為陽性對(duì)照,分為：①正常對(duì)照組；②TGF-β1誘導(dǎo)組；③TGF-β1+益腎化瘀方低劑

4、量組；④TGF-β1+益腎化瘀方中劑量組；⑤TGF-β1+益腎化瘀方高劑量組；⑥TGF-β1+纈沙坦組。培養(yǎng) 48h后取出,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技術(shù)和細(xì)胞免疫化學(xué)技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞α-SMA、TGF-β1的mRNA及Smad7蛋白表達(dá)。每組后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
　　結(jié)果：①與正常對(duì)照組相比,TGF-β1刺激組細(xì)胞從鋪路石樣上皮細(xì)胞向

5、梭形肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變,免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見Samd7染色陽性細(xì)胞顯著減少；益腎化瘀方組細(xì)胞形態(tài)變化不顯著,益腎化瘀方大劑量組上述染色陽性細(xì)胞數(shù)量與正常對(duì)照組差別不明顯,代文組細(xì)胞變化與益腎化瘀方大劑量組相似。②與正常對(duì)照組相比,益腎化瘀方高劑量組α-SMA、 TGF-β1mRNA及Smad7蛋白的表達(dá)水平無顯著性差異(p>0.05)；益腎化瘀方低、中、高劑量均能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的TGF-β1、α-SMAmRNA 表達(dá),上調(diào) Smad

6、7 蛋白的表達(dá),且呈劑量依賴性。益腎化瘀方高劑量組TGF-β1、α-SMAmRNA的表達(dá)水平顯著低于TGF-β1刺激組(p<0.05),益腎化瘀方高劑量組TGF-β1、α-SMAmRNA表達(dá)與纈沙坦組比較無顯著性差異(p>0.05)。③相各治療組TGF-β1、α-SMAmRNA及Smad7蛋白的表達(dá)與TGF-β1刺激組差異顯著(p﹤0.05)；且其抗 RIF 作用與中藥的劑量呈正相關(guān)；纈沙坦組細(xì)胞變化與益腎化瘀方高劑量組相似。