一株溶血性蠟狀芽孢桿菌WH2015全基因組測(cè)序分析及其溶血基因篩選.pdf

1、蠟狀芽孢桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，能形成孢子，在食品中分布廣泛，如大米，雞蛋，調(diào)味料，肉，奶制品，甚至在藥物中也有。在許多國(guó)家，包括美國(guó)，加拿大和荷蘭，由蠟狀芽孢桿菌引起的，較為嚴(yán)重的食物中毒事件早已有報(bào)道，中毒者表現(xiàn)出嘔吐、腹瀉癥狀。
　　本研究中，從養(yǎng)殖大菱鲆體表潰爛處分離到一株溶血性細(xì)菌，而大菱鲆目前已成為在中國(guó)的海水養(yǎng)殖魚類中主要品種之一，年產(chǎn)量超過6萬噸，在大菱鲆養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展過程中，魚病的發(fā)生是一個(gè)嚴(yán)重的問題，許多的病

2、原菌都能引起宿主敗血癥，此分離菌株可能是某一致病菌，因此我們對(duì)此溶血性細(xì)菌進(jìn)行以下研究:
　　1.經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定和系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析，分離菌株聚集于蠟狀芽孢桿菌。根據(jù)其分離的時(shí)間和地點(diǎn)，被命名為蠟狀芽孢桿菌WH2015。
　　2.血平板溶血試驗(yàn)證實(shí)WH2015菌株能夠裂解羊紅細(xì)胞，電子掃描電鏡分析也證實(shí)蠟狀芽孢桿菌WH2015對(duì)血細(xì)胞具有一定的損傷能力。
　　3.對(duì)蠟狀芽孢桿菌WH2015基因組測(cè)序和分析的結(jié)果顯示其基因組大

3、小為5.8 Mb，平均G+C含量為35％，有6568個(gè)基因，98條tRNA序列。與其它蠟狀芽孢桿菌株系進(jìn)行比較基因組分析顯示，WH2015菌株基因組幾乎擁有所有的核心溶血性基因，共23個(gè)毒力因子基因，其中包括1個(gè)hbl操縱子基因，1個(gè)hlyⅢ基因，提示其溶血機(jī)理與其它報(bào)導(dǎo)過的蠟狀芽孢桿菌株系的溶血機(jī)理相似。
　　4.為驗(yàn)證溶血基因的功能，本文還成功構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-hblC、pET-28a-hblD、 pET-28a