Fluvastatin抑制肺動脈瓣內皮細胞鈣化及其機制研究.pdf

1、背景:血管鈣化是礦物質代謝失調在心血管系統(tǒng)的表現(xiàn)。它以病變的動脈壁及瓣膜中大量鈣質的沉積和骨樣組織形成為標志性病理改變,動脈瓣膜是最容易受累的部位。瓣膜鈣化最初被認為是一種老年退行性病變,現(xiàn)已證實是一個主動的炎癥、增生和生物礦化的過程。新生微血管和骨樣組織形成在瓣膜鈣化早期的特征性表現(xiàn)提示了血管內皮細胞生長因子VEGF在瓣膜鈣化過程中的重要作用。
　　目的:探討VEGF是否能夠引起瓣膜內皮細胞鈣化及其可能的分子機制。
　　方

2、法:取原代培養(yǎng)的人肺動脈瓣內皮細胞,VEGF作用后,以fura-2檢測細胞內鈣信號;熒光顯微鏡下觀察VEGF刺激后GFP-NFAT融合蛋白的核轉位;real-time PCR檢測 BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成相關基因的表達;Von Kossa染色檢測細胞鈣化。
　　結果:100ng/ml VEGF的刺激激發(fā)了人肺動脈瓣內皮細胞中鈣振蕩的產生,頻率為0.3±0.03次/min

3、,波寬80±3.5S,并引起NFAT快速的核轉位。BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin的mRNA水平在刺激后6-24小時均顯著提高,并在48小時左右回落。刺激后72小時,在培養(yǎng)單層細胞的基質中發(fā)現(xiàn)鈣化斑塊的出現(xiàn)。
　　結論:VEGF誘導瓣膜內皮細胞骨化相關基因的表達,促進內皮細胞鈣化;這種作用與VEGF激發(fā)瓣膜內皮細胞鈣振蕩,進而引發(fā)NFAT活化及核轉位有關。
　　背景:Fluvas

4、tatin是一種他汀類藥物,是HMG-CoA還原酶的抑制劑,可通過與HMG-CoA還原酶的活性中心結合,阻斷甲羥戊酸代謝途徑,起到心血管保護作用。
　　目的:探討fluvastatin是否能夠抑制VEGF所造成的瓣膜內皮細胞鈣化及其與細胞內鈣信號間的關系。
　　方法:培養(yǎng)的人肺動脈內皮細胞以fluvastatin預先處理24小時,再給予100ng/ml VEGF刺激,fura-2檢測細胞內鈣信號;表達GFP-NFAT融合蛋白

5、的質粒轉染細胞,熒光顯微鏡下觀察VEGF刺激后GFP-NFAT的核轉位;real-time PCR檢測BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成相關基因的表達;Von Kossa染色檢測細胞鈣化。
　　結果:10nM fluvastatin的預處理抑制了瓣膜內皮細胞中鈣振蕩的產生及后繼的NFAT核轉位。BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成

6、相關基因的mRNA水平分別降低了(50.61±10.88)％,(82.23±22.11)％,(85.58±19.03)％和(85.57±8.42)％。VEGF刺激后72小時,在培養(yǎng)單層細胞的基質中未見鈣化斑塊。
　　結論:fluvastatin有效抑制了VEGF所引起的瓣膜內皮細胞鈣化,且這種作用是通過其抑制細胞內鈣信號依賴的NFAT信號通路來實現(xiàn).
　　背景: GGPP是除膽固醇以外被statins阻斷的另一類異戊二烯。研

7、究提示statins的多種保護性藥理學作用均與對GGPP的合成阻斷,從而影響細胞中小G蛋白活性有關。
　　目的:探討fluvastatin抑制VEGF所致瓣膜內皮細胞鈣化的機制.
　　方法:培養(yǎng)的人肺動脈內皮細胞以GGPP和fluvastatin共同預處理24小時,再給予100ng/ml VEGF刺激,fura-2檢測細胞內鈣信號;表達NFAT-GFP融合蛋白的質粒轉染細胞,熒光顯微鏡下觀察VEGF刺激后NFAT的核轉位;r

8、eal-time PCR檢測BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprotegerin等骨形成相關基因的表達;Von Kossa染色檢測細胞鈣化。
　　結果:10nM的GGPP和fluvastatin共同預處理后,VEGF仍然可以誘導瓣膜內皮細胞中鈣振蕩的產生,頻率為0.074±0.02次/min,波寬65.7±8.8S,以及NFAT的核轉位。BMP-2、cbfa1、osteocalcin及osteoprote