以HIV-1 Vif為靶點(diǎn)天然藥物先導(dǎo)化合物的篩選及其藥效學(xué)研究.pdf

1、艾滋病(AIDS)是由人免疫缺陷病毒(HIV)所引起，在不到30年的時(shí)間已成為肆虐全世界令人可畏的致死性傳染病，到目前為止已有210多個(gè)國(guó)家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)該種疾病。高效抗逆轉(zhuǎn)錄療法(HAART)的使用雖然在一定程度上有效地遏制艾滋病的傳播，但隨之HIV-1感染者體內(nèi)出現(xiàn)的藥物毒性與抗藥性，以及其昂貴的治療價(jià)格等因素導(dǎo)致其繼續(xù)蔓延。因此，尋找新的抗病毒靶點(diǎn)并建立相應(yīng)的藥物篩選平臺(tái)顯得尤為重要。近年，HIV病毒感染因子Vif被證實(shí)能夠結(jié)合人體抗

2、病毒因子載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽樣蛋白3G(APOBEC3G)，引起抗病毒因子的降解，從而使HIV-1毒粒的感染力增強(qiáng)10-1000倍。Vif和APOBEC3G之間相互作用的研究證實(shí)Vif將成為抗HIV藥物開(kāi)發(fā)的新靶點(diǎn)。 本研究在構(gòu)建出HIV-1 Vif與人APOBEC3G原核表達(dá)蛋白的基礎(chǔ)之上，依賴(lài)我國(guó)豐富的天然藥物寶庫(kù)，利用Biacore技術(shù)對(duì)豐富的藥物庫(kù)資源進(jìn)行高通量篩選，尋找針對(duì)兩個(gè)蛋白為靶點(diǎn)的天然藥物有效提取

3、物藥物先導(dǎo)化合物的研究。得到先導(dǎo)化合物CD60％醇提物乙酸乙酯部分，而后構(gòu)建出HIV—1 Vif與人APOBEC3G的真核表達(dá)質(zhì)粒，利用共轉(zhuǎn)染和Western Blot等檢測(cè)技術(shù)在真核表達(dá)體系中進(jìn)一步研究得出50μg/ml的CD60％醇提物乙酸乙酯部分能夠?qū)IV-1Vif降解APOBEC3G蛋白產(chǎn)生保護(hù)性作用；最后將所篩選出CD60％醇提物乙酸乙酯部分在細(xì)胞培養(yǎng)體系中進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)價(jià)，利用HIV-1感染MT4的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證明其對(duì)病毒