L-聚組氨酸抑制LPS引起的豬精子凋亡及其對精液品質(zhì)的影響.pdf

1、豬精液液態(tài)保存是人工授精技術(shù)的基礎(chǔ)，在精液液態(tài)保存過程中，精液中細菌溶菌產(chǎn)生的脂多糖(LPS)不僅能降低精液品質(zhì)、縮短精子壽命、誘導(dǎo)精子凋亡，而且還能隨著輸精進入母畜生殖道內(nèi)引起母畜生殖道免疫反應(yīng)，造成生殖道免疫細胞極增而吞噬精子。L-聚組氨酸(L-pHis)能與LPS結(jié)合，但其能否抑制LPS對精子凋亡的影響尚未見報道。本研究中，通過向豬精液中添加L-pHis，檢測其對豬精液細菌濃度、LPS濃度、精液品質(zhì)是否造成影響，以及能否降低豬精子

2、的凋亡率，并初步闡釋其作用機制。
　　研究中共收集24頭公豬的精液，每4～5個個體的精液混合形成5個樣本池(n=5)，用BTS稀釋液稀釋至密度為4×106/mL，然后將精液液態(tài)保存(17℃)和37℃進行試驗。首先在0、6、12、36、72、120h測定精液稀釋后液態(tài)保存過程中精液中細菌菌落濃度以及精漿中LPS濃度隨時間的變化;然后以稀釋精液為對照組，分別添加多粘菌素B(PMB)至PMB濃度為100μg/mL為PMB組，L-聚組氨酸

3、(L-pHis)至L-pHis為100μg/mL為L-聚組氨酸組，液態(tài)保存下于0、6、12、36、72、120h檢測三個組中細菌濃度、LPS濃度、精液品質(zhì)（精子活率、精子活力指數(shù)、運動速率）和精子的凋亡率，37℃保存下于0、1、3、6、9、12、24h檢測三個組中精液品質(zhì)（精子活率、精子活力指數(shù)、運動速率）和凋亡率;最后通過添加2μg/mL Anti-CD14于精液中，阻斷LPS-TLR4的結(jié)合，初步闡釋L-pHis抑制LPS誘導(dǎo)精子凋

4、亡的作用機制。研究結(jié)果表明:(1)豬精液在液態(tài)保存過程中，細菌濃度從36h開始迅速增加，36h(4980±381.58 CFU/mL)、72h（12920±2833.66 CFU/mL）、120h(40020±4755.38 CFU/mL)細菌濃度持續(xù)顯著增加(P＜0.05)，細菌平均濃度達到1.02×104 CFU/mL;精液LPS濃度隨保存時間無顯著性變化(P＞0.05)，其平均濃度達到4.70±0.21 EU/mL。(2)在精液稀

5、釋液中添加100μg/mL L-pHis或100μg/mL PMB對液態(tài)精液保存中LPS的濃度沒有顯著影響(P＞0.05)，但是它們能提高在液態(tài)保存和37℃下精液品質(zhì)（精子活力指數(shù)、精子速率、精子活率）和降低精液細菌濃度。(3)液態(tài)保存和37℃保存下在精液稀釋液中添加100μg/mL L-pHis和100μg/mL PMB均能顯著抑制精子凋亡(P＜0.05)，但PMB抑制精子凋亡能力優(yōu)于L-pHis(P＜0.05)。(4) L-pHis