移植人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進大鼠腦梗死后神經(jīng)再生及功能恢復(fù).pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩69頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:
   第三次全國死因調(diào)查結(jié)果顯示,腦血管病已成為我國城鄉(xiāng)居民首位死亡原因,占死亡總數(shù)的22.45%,是單病種致死、致殘率最高的疾病,已成為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。腦梗死在腦血管病中最為常見,除發(fā)病4.5 h內(nèi)及時溶栓治療外,腦梗死至今尚無切實有效的根治方法。
   上世紀(jì)末開始,干細(xì)胞研究迅速發(fā)展。在干細(xì)胞及其治療腦梗死的基礎(chǔ)和臨床前期研究方面成果眾多。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mes

2、enchymal stemcells,BMSCs)作為細(xì)胞治療的主要成員之一,具備取材方便、免疫原性低、很少涉及倫理、可自體移植等優(yōu)點。目前,動物實驗研究結(jié)果提示,BMSCs對腦梗死有治療作用,能促進腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù);此外,臨床試驗近年來日益增多,部分結(jié)果證實BMSCs治療腦梗死安全且有效,這些均給腦梗死的臨床治療帶來希望。然而,BMSCs治療腦梗死的確切機制至今尚未研究清楚。起初倍受關(guān)注的“細(xì)胞替代學(xué)說”遭到質(zhì)疑。目前,大多學(xué)者認(rèn)

3、為,BMSCs的治療作用可能與其分泌的各種因子有關(guān)。
   腦梗死能誘發(fā)自身內(nèi)源性神經(jīng)干/前體細(xì)胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)的增殖,這些增殖的細(xì)胞遷移到梗死灶周邊(ischemic boundaryzone,IBZ)并分化為神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。但是,大部分增殖的內(nèi)源性NSPCs會在數(shù)天內(nèi)凋亡,對腦梗死后神經(jīng)功能的恢復(fù)作用有限。NSPCs的迅速凋亡可能與腦梗死后梗死周邊極度缺乏血運和營養(yǎng)

4、的惡劣微環(huán)境有關(guān)。本實驗就腦內(nèi)移植BMSCs促進大鼠腦梗死后血管新生,改善梗死周邊微環(huán)境,從而激活內(nèi)源性神經(jīng)再生的機制進行探討。
   方法:
   采集正常成人男性志愿者骨髓,分離、純化獲得人BMSCs(human BMSCs,hBMSCs),體外培養(yǎng)擴增至第5代,進行細(xì)胞表型鑒定和染色體分析。線栓法建立雌性SD大鼠大腦中動脈栓塞2 h再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCA

5、O),隨機分為2組:①hBMSCs移植組,在模型建立后3 d,腦內(nèi)立體定向移植hBMSCs5x105;②對照組,移植等體積生理鹽水10μ1。腹腔注射5-溴脫氧尿嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU),標(biāo)記增殖的內(nèi)源性NSPCs。(1)改良神經(jīng)損傷嚴(yán)重程度評分(modified neurological severity scores,mNSS)和粘貼物移除實驗分別評估神經(jīng)功能恢復(fù)情況;(2)伊紅.蘇木素染色計算大鼠相對腦梗

6、死體積;(3)18F—FDGmicro-PET分析大鼠移植hBMSCs前后腦梗死周邊代謝的變化;(4)BrdU和vWF熒光雙染標(biāo)記增殖的血管內(nèi)皮細(xì)胞,CD31標(biāo)記新生血管;(5)激光多普勒血流儀檢測腦梗死周邊腦血流變化;(6)BrdU、Nestin和musashi1免疫熒光染色標(biāo)記室管膜下區(qū)(subventricularzone,SVZ)和海馬齒狀回顆粒層下區(qū)(subgranularzone,SGZ)的NSPCs;(7)通過免疫熒光雙染

7、的方法研究NSPCs的遷移、分化和凋亡,BrdU+/DCX+細(xì)胞提示NSPCs向神經(jīng)元前體細(xì)胞分化,BrdU+/NeuN+細(xì)胞提示NSPCs向成熟神經(jīng)元分化,Brdu+/GFAP+細(xì)胞提示NSPCs向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化,BrdU+/TUNEL+細(xì)胞提示NSPCs凋亡;(8)western blot測定梗死側(cè)腦組織VEGF、nestin、musashi1、ki-67和DCX的表達(dá)量。(9)熒光原位雜交技術(shù)(fluorescence insi

8、tu hybridization,FISH)追蹤移植入大鼠腦內(nèi)的hBMSCs。
   結(jié)果:
   1、MCAO模型后2 W開始,hBMSCs移植組和對照組比較,行為學(xué)恢復(fù)更為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),表現(xiàn)為mNSS評分下降以及粘貼物移除實驗中大鼠去除粘貼物的時間縮短。
   2、MCAO模型后12 W,伊紅-蘇木素染色顯示右側(cè)大腦中動脈供血區(qū)域大腦皮質(zhì)和基底核外側(cè)梗死灶,hBMSCs移植組大鼠相對

9、梗死體積為27.6%±4.8%,對照組大鼠相對梗死體積為36.4%±6.2%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   3、MCAO模型后2 W,micro-PET結(jié)果顯示,hBMSCs移植組大鼠梗死側(cè)皮質(zhì)和紋狀體攝取18F-FDG增加,代謝缺損較對照組減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   4、同對照組比較,hBMSCs移植組大鼠腦梗死周邊BrdU+/vWF+細(xì)胞和CD31陽性血管數(shù)量增多,梗死側(cè)大腦中動脈供血

10、區(qū)域腦血流(CBF)在MCAO模型后2w(移植細(xì)胞后11 d)明顯升高,腦梗死周邊VEGF表達(dá)量增加,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   5、同對照組比較,hBMSCs移植組SVZ區(qū)和SGZ區(qū)內(nèi)源性NSPCs增殖、向IBZ區(qū)遷移以及向神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞分化均顯著增強,而NSPCs凋亡減少,另外,腦梗死側(cè)nestin、musashi1、ki-67和DCX的表達(dá)量增高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
   6

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論