獸疫鏈球菌合成透明質(zhì)酸相關(guān)基因的克隆與表達(dá).pdf

1、透明質(zhì)酸是一種由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖以β-1-3和β-1-4糖昔鍵相連的二糖單位重復(fù)構(gòu)建而成的，具有生物相容性的高分子聚合物。由于特殊的生理作用、獨(dú)特的流變學(xué)特性和極強(qiáng)的持水保濕能力，透明質(zhì)酸在醫(yī)學(xué)研究、臨床治療、化妝品工業(yè)等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。 透明質(zhì)酸廣泛分布于各種動(dòng)物組織中，一些兼性厭氧革蘭氏陽性鏈球菌，如鏈球菌屬A群(group A streptococcus,GAS)，C群(group C streptococ

2、cus,GCS)的菌膜中也有透明質(zhì)酸存在。由于動(dòng)物組織的原料有限，且透明質(zhì)酸的含量低，同時(shí)提取成本高，因而價(jià)格十分昂貴。而微生物發(fā)酵法，所需的原料易得，大大降低了生產(chǎn)成本。 本研究首先對獸疫鏈球菌(Streptococcus Zooepidemicus)中與透明質(zhì)酸合成有關(guān)的基因做了研究，主要包括透明質(zhì)酸合成酶基因和磷脂酰甘油磷酸合成酶基因以及透明質(zhì)酸分解酶基因。 透明質(zhì)酸合成酶基因是生物合成HA途徑中的關(guān)鍵酶，其活性和

3、穩(wěn)定性決定了透明質(zhì)酸產(chǎn)量和質(zhì)量，它還參與HA輸出到胞外。對實(shí)驗(yàn)室保存的獸疫鏈球菌的透明質(zhì)酸合成酶基因的進(jìn)行了克隆及測序，通過序列分析，證明其屬于合成透明質(zhì)酸活性較高的合成酶，同時(shí)也結(jié)果驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)室保存生產(chǎn)透明質(zhì)酸的鏈球菌為獸疫鏈球菌。 分離得到獸疫鏈球菌的磷脂酰甘油磷酸合成酶基因序列。序列分析顯示：其開放閱讀框?yàn)?31的堿基，序列編碼的蛋白含有176個(gè)氨基酸殘基，分子量為19400，等電點(diǎn)為8.8，其中含有63個(gè)疏水氨基酸，預(yù)示

4、其可能膜結(jié)合特性。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)該蛋白含3個(gè)跨膜域。此外，該蛋白與已知的產(chǎn)膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)的磷脂酰甘油磷酸合成酶具有85％的氨基酸序列相似性。磷脂酰甘油磷酸合成酶基因，它與心磷脂的合成有密切關(guān)系，心磷脂是對透明質(zhì)酸合成酶的生物活性及穩(wěn)定性有重要影響。它的分離對提高透明質(zhì)酸合成酶活性，對提高透明質(zhì)酸產(chǎn)量及提高分子量提供理論基礎(chǔ)。對本實(shí)驗(yàn)室保存的獸疫鏈球菌改造提供了一個(gè)方向。透明質(zhì)酸分解酶是是一種胞