Wnt-β-catenin信號通路與胰腺癌吉西他濱耐藥關(guān)系的初步研究.pdf

1、1背景和目的
　　 胰腺癌是最常見的惡性腫瘤之一，在美國與癌癥相關(guān)的死亡原因位居第位四。早期胰腺癌患者通常采用手術(shù)治療、輔助化療或放療，或聯(lián)合治療。手術(shù)切除是治療胰腺癌的唯一機(jī)會，但是，只有不到20％的胰腺癌患者適合手術(shù)治療，因為胰腺癌通常在發(fā)現(xiàn)時已處于進(jìn)展期。吉西他濱是目前治療胰腺癌的一線藥物，治療局部進(jìn)展期胰腺癌時單藥有效率僅為17.3％，無進(jìn)展生存期為3.7個月；聯(lián)合奧沙利鉑的有效率為26.8％，無進(jìn)展生存期為5.8個月。

2、吉西他濱耐藥可以是原發(fā)的或繼發(fā)的，這是在化療失敗的最可能的原因之一。吉西他濱有一個復(fù)雜的代謝途徑，很多機(jī)制均可以促進(jìn)吉西他濱的細(xì)胞毒性和/或化療耐藥。Wnt信號通路已被報告將在癌癥發(fā)展和耐藥參與了白血病和肝癌。迄今為止，關(guān)于與Wnt信號和吉西他濱耐藥性的關(guān)系研究很少。在此研究的第一和第二部分中，我們研究了典型信號通路之間的Wnt和吉西他濱耐藥的相關(guān)性。在第三部分，我們使用流式細(xì)胞儀檢測了胰腺癌細(xì)胞株相關(guān)干預(yù)前后腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志的比例分

3、布。
　　 2主要試劑
　　 吉西他濱（200mg/支），Wnt3a和Dkk-1（10μg，R&D）
　　 3統(tǒng)計學(xué)分析
　　 報告基因和MTT結(jié)果兩兩組間比較采用單因素方差，后續(xù)檢驗采用q檢驗。相關(guān)性檢驗使用Pearson檢驗。當(dāng)p<0.05時認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。
　　 4實驗方法和結(jié)果
　　 在本研究的第一部分，四株胰腺癌細(xì)胞SW1990，PANC-1，T3M4和BxPC-3等用于

4、MTT法檢測吉西他濱的耐藥性，以半數(shù)抑制濃度或IC50表示；使用熒光素酶報告基因檢測Wnt信號通路活性。結(jié)果顯示，SW1990對吉西他濱耐藥性最強(qiáng)，伴隨著Wnt信號通路異常活化。對這四株細(xì)胞進(jìn)行Pearson相關(guān)性檢驗分析可得經(jīng)典Wnt信號通路與吉西他濱耐藥呈非線性正相關(guān)。
　　 在本研究的第二部分，我們選擇了SW1990為研究對象。分別用Wnt信號通路的激動劑rWnt3a和抑制劑rDkk-1處理SW1990細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)rWnt3

5、a和rDkk-1分別能有效地刺激或抑制Wnt信號通路的活性。rWnt3a對SW1990的生長和吉西他濱耐藥都有促進(jìn)作用，而rDkk-1則對SW1990的生長和耐藥均無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。
　　 在本研究的第三部分，我們運用流式細(xì)胞儀檢測CD133、CD44、CD24和EpCAM在SW1990，PANC-1，T3M4和SW1990/Gem（SW1990耐吉西他濱細(xì)胞株）等四株胰腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)。并且檢測用吉西他濱、rWnt3a和r

6、Dkk-1對SW1990細(xì)胞干預(yù)后細(xì)胞表面CD133的表達(dá)。結(jié)果顯示SW1990和SW1990/Gem中CD133的陽性表達(dá)率分別為5.7％和37.8％，SW1990吉西他濱處理三天CD133的陽性表達(dá)率為5.6％；PANC-1和T3M4中CD133無表達(dá)；CD44+CD24+EpCAM+細(xì)胞的比例在各株細(xì)胞間差異較大；使用rWnt3a和rDkk-1處理SW1990后，CD133+細(xì)胞的比例可分別上升（13.4％）和下降（3.0％）。<

7、br>　　 5結(jié)論
　　 胰腺癌細(xì)胞株之間對吉西他的濱耐藥性差異很大，可分為兩組：耐藥組（SW1990、PANC-1）和敏感組（T3M4、BxPC-3）：
　　 Wnt信號通路的高水平激活在胰腺癌細(xì)胞株中不是普遍現(xiàn)象；
　　 胰腺癌細(xì)胞株對吉西他濱的耐藥性與經(jīng)典的Wnt信號通路活性之間呈非線性正相關(guān)；
　　 rWnt3a和rDkk-1可有效地調(diào)節(jié)Wnt信號通路活性，rWnt3a上調(diào)信號可介導(dǎo)細(xì)胞對吉西他