JAK2-STAT3信號(hào)通路與胰腺癌曲古抑菌素A耐藥關(guān)系的初步研究.pdf

1、研究背景：
　　胰腺癌是常見的消化惡性腫瘤之一，也是目前預(yù)后最差的實(shí)體性腫瘤。近年來(lái)其發(fā)病率國(guó)內(nèi)外均有明顯升高，在我國(guó)胰腺癌是死亡率第6位的常見惡性腫瘤。目前研究認(rèn)為，胰腺癌的發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多基因參與、多階段發(fā)展的過(guò)程，它與眾多基因的表達(dá)及相互作用有關(guān)，而這些基因的表達(dá)是決定胰腺癌表型多樣性的分子基礎(chǔ)。胰腺癌的治療仍以化療為主，但是大多數(shù)藥物療效不佳且副作用較大，而胰腺癌耐藥的產(chǎn)生是導(dǎo)致胰腺癌化療失敗的主要原因。研究顯示，組蛋白

2、去乙酰化酶抑制劑能夠抑制HDAC的活性，從而可以選擇性地調(diào)控部分腫瘤生長(zhǎng)、增殖相關(guān)基因。曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)作為一種新型的低毒性化療藥物，胰腺癌仍然對(duì)其易產(chǎn)生耐藥性。TSA誘導(dǎo)建立胰腺癌耐藥株后，并研究耐藥株中JAK2/STAT3信號(hào)通路變化情況，進(jìn)而對(duì)調(diào)控該通路來(lái)研究其耐藥機(jī)制。本研究意在闡明JAK2/STAT3信號(hào)通路在胰腺癌細(xì)胞耐藥機(jī)制形成中的作用，為腫瘤研究提供新思路。
　　目的：
　

3、　本研究模擬胰腺癌體內(nèi)耐藥機(jī)制產(chǎn)生。首先應(yīng)用IL-6誘導(dǎo)激活JAK2/STAT3信號(hào)通路情況，其次通過(guò)構(gòu)建TSA耐藥人胰腺癌細(xì)胞，檢測(cè)耐藥株的特性。進(jìn)而干預(yù)JAK2/STAT3信號(hào)通路對(duì)耐藥株所產(chǎn)生的影響，檢測(cè)JAK2、STAT3、P-STAT3表達(dá)情況，并檢測(cè)下游基因表達(dá)，探討STAT3信號(hào)通路與胰腺癌耐藥的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.人體標(biāo)本:免疫組化法檢測(cè)病人胰腺癌組織標(biāo)本中JAK2/STAT3上游細(xì)胞因子IL-6的

4、表達(dá)情況。
　　2.檢測(cè)PANC-1、SW1990、AsPC-1、Patu8988人胰腺癌細(xì)胞株中JAK2/STAT3蛋白表達(dá)，通過(guò)Western bolt方法檢測(cè)四種人胰腺癌細(xì)胞株中JAK2、STAT3、P-STAT3蛋白的表達(dá)含量。
　　3.使用TSA梯度增加濃度方法建立PANC-1-TSA耐藥株，PANC-1、PANC-1-TSA人胰腺癌細(xì)胞株在IL-6刺激48小時(shí)下來(lái)激活JAK2/STAT3通路。提取 PANC-1、

5、PANC-1-TSA蛋白和mRNA，進(jìn)一步通過(guò)Western bolt檢測(cè)STAT3和P-STAT3表達(dá)的變化，PCR檢測(cè)c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表達(dá)情況。
　　4.應(yīng)用JAK2抑制劑AG490(10μM，30μM，60μM)作用于PANC-1、PANC-1-TSA細(xì)胞48小時(shí)，CCK-8檢測(cè)不同濃度作用下兩種胰腺癌細(xì)胞株細(xì)胞活力;另外提取PANC-1-TSA的m

6、RNA和蛋白，Western blot檢測(cè)STAT3、P-STAT3蛋白表達(dá)情況，PCR檢測(cè)c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，96例胰腺癌標(biāo)本中，其中有77例標(biāo)本存在IL-6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)，比例為80.2％。
　　2.在四種不同胰腺癌細(xì)胞株中，Western blot結(jié)果顯示在所有細(xì)胞株中JAK2和STAT3都存

7、在表達(dá)。
　　3.Western blot結(jié)果顯示PANC-1-TSA細(xì)胞的STAT3、P-STAT3蛋白表達(dá)高于PANC-1細(xì)胞，c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA表達(dá)也顯示出明顯差異(P＜0.05)。
　　4.在JAK抑制劑AG490(DMSO，10μM，30μM和60μM)的作用下，CCK-8檢測(cè)結(jié)果顯示在24小時(shí)和48小時(shí)作用下PANC-1-TSA細(xì)胞的活力低

8、于PANC-1細(xì)胞(P＜0.05)。PANC-1-TSA細(xì)胞中STAT3和P-STAT3的表達(dá)隨著AG490的濃度增加而減少，c-Myc、c-Src、HIF1-α、Cyclin D1、Bcl-2、Bcl-xl的mRNA差異(P＜0.05)
　　結(jié)論：
　　1.病人的胰腺癌組織存在著IL-6的高陽(yáng)性表達(dá)，IL-6刺激耐藥與非耐藥株，中顯示IL-6在胰腺癌的JAK2/STAT3信號(hào)通路起重要的作用。
　　2.研究正常細(xì)胞株