胎盤LINE-1甲基化狀態(tài)及不同一性雙胎產(chǎn)前治療的研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文胎盤LINE1甲基化狀態(tài)及不同一性雙胎產(chǎn)前治療的研究姓名：何志明申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：方群20100603⑧博士學(xué)位論文胎盤LmE1甲基化狀態(tài)及不同一性雙胎產(chǎn)前治療的研究現(xiàn)的LINE一1甲基化程度下降是否也會發(fā)生在胎盤發(fā)育過程中呢胎盤LINE一1的甲基化程度在子癇前期中有否改變在腫瘤細(xì)胞中，LINE一1的甲基化狀態(tài)與LINE1的表達(dá)有關(guān)，而且可能是引起細(xì)胞異常增殖的因素之一，那么在胎盤中，整體細(xì)胞

2、增殖狀態(tài)是否與LINE一1的甲基化和轉(zhuǎn)錄活性有關(guān)呢這些問題都值得我們?nèi)ヌ接?。本部分研究目的?通過亞硫酸氫鹽限制分析法(combinedbisulfiterestrictionanalysis，COBRA)、重亞硫酸氫鹽測序等方法，比較第一、第三孕期胎盤LINE1的甲基化狀態(tài)，探討不同發(fā)育階段的胎盤LINE一1甲基化水平的變化；2對比正常第三孕期與子癇前期胎盤的LINE一1甲基化狀態(tài)，以此探討子癇前期胎盤LINE一1甲基化狀態(tài)是否存在改

3、變；3以5甲基胞嘧啶(5一MefhyIcytdine，5mC)免疫組化染色評估胎盤的整體甲基化程度，與其LINE一1甲基化程度比較，觀察LINE1甲基化水平與整體甲基化水平的變化是否一致；4探討DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAMethyIransferases，DNMTs)在第一孕期、第三孕期及子癇前期中的表達(dá)變化及其與LINE一1甲基化的關(guān)系；5研究LINE一1甲基化狀態(tài)、LINE一1轉(zhuǎn)錄活性與胎盤增殖狀態(tài)之間的關(guān)系。第一章正常妊娠與子癇前期

4、胎盤LINE1甲基化狀態(tài)及相關(guān)因素分析收集9例早孕胎盤、13例正常第三孕期胎盤和9例子癇前期胎盤，提取DNA后行重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，然后PCR擴增LINE一15’末端非翻譯區(qū)(5’UntranslatableRegion，5’UTR)的共有序列，以COBRA方法評估LINE1的甲基化程度，并以測序法檢驗COBRA的測量結(jié)果。對胎盤石蠟切片行5mC免疫組織化學(xué)染色，以此評估胎盤的整體甲基化狀態(tài)。采用反轉(zhuǎn)錄實時定量PCR技術(shù)檢測DNMTS(D