LEP基因啟動(dòng)子區(qū)在不同組織中的甲基化狀態(tài)及代謝手術(shù)對(duì)其甲基化的影響.pdf

1、目的:肥胖及其合并癥嚴(yán)重威脅人類健康，而我國(guó)已經(jīng)成為世界第一肥胖大國(guó)，阻斷肥胖的流行趨勢(shì)是目前臨床研究的熱點(diǎn)。代謝手術(shù)已經(jīng)被公認(rèn)為治療肥胖及其相關(guān)合并癥最為長(zhǎng)期有效的治療措施，但是臨床上仍有少數(shù)病人對(duì)代謝手術(shù)的治療反應(yīng)性不佳，提示在機(jī)制和適應(yīng)證選擇方面仍有研究空間。表觀遺傳學(xué)，特別是DNA甲基化在肥胖及相關(guān)疾病的發(fā)生和發(fā)展中有重要意義。本研究選取了在肥胖發(fā)生中較為重要的LEP基因，通過研究LEP基因啟動(dòng)子區(qū)在不同組織中的DNA甲基化水平

2、及其對(duì)LEP基因表達(dá)的調(diào)控情況，以及代謝手術(shù)對(duì)人體LEP基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化的干預(yù)情況，明確LEP基因在肥胖及其相關(guān)合并癥的發(fā)生與發(fā)展中的作用，并評(píng)估代謝手術(shù)對(duì)這一基因甲基化的影響，以便為肥胖及代謝綜合征的相關(guān)研究提供新的方向。
　　方法:1、選取2014年10月至2015年10月間接受減重手術(shù)治療的38名成年肥胖病人以及同期12名非肥胖成人，每名病人分別獲取其外周血、腹部皮下脂肪組織及內(nèi)臟脂肪組織（大網(wǎng)膜脂肪）標(biāo)本;2、甲基

3、化特異性PCR法(MS-PCR)對(duì)獲得標(biāo)本中LEP基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化情況進(jìn)行分析，比較個(gè)體間及組織間差異;3、實(shí)時(shí)熒光PCR法(qPCR)對(duì)LEP基因轉(zhuǎn)錄情況進(jìn)行測(cè)定，并結(jié)合血leptin濃度進(jìn)行分析，研究LEP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化對(duì)該基因表達(dá)以及其產(chǎn)物生成的影響;4、分別對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞及小鼠脂肪細(xì)胞進(jìn)行去甲基化處理，分別測(cè)定兩種細(xì)胞去甲基化處理前后LEP基因mRNA的含量，研究去甲基化對(duì)LEP基因轉(zhuǎn)錄的影響;5、對(duì)38名接受代謝手

4、術(shù)的肥胖患者進(jìn)行1年的術(shù)后隨訪，收集相關(guān)術(shù)后臨床資料，并對(duì)其術(shù)后外周血LEP基因啟動(dòng)子甲基化水平進(jìn)行研究，明確手術(shù)對(duì)肥胖病人DNA甲基化水平是否存在影響。
　　結(jié)果:1、同一個(gè)體內(nèi)外周血淋巴細(xì)胞、皮下脂肪組織及內(nèi)臟脂肪組織中的LEP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平無顯著差異;2、與體重正常者相比，肥胖患者LEP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平更低(P＜0.001);3、與體重正常者相比，肥胖患者LEP基因mRNA在脂肪組織中水平更高(P＜0.001)

5、;4、經(jīng)去甲基化處理后，人皮膚成纖維細(xì)胞及小鼠脂肪細(xì)胞中LEP基因轉(zhuǎn)錄水平均增加;5、38名肥胖患者代謝手術(shù)術(shù)后1年，多余體重減少58％，胰島素抵抗水平明顯降低，未發(fā)生嚴(yán)重并發(fā)癥;6、代謝手術(shù)術(shù)后患者出現(xiàn)LEP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平上升及血leptin水平降低，與術(shù)前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.外周血淋巴細(xì)胞LEP基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平可以用于衡量脂肪組織中該基因甲基化水平;2.不同個(gè)體間特定組織LEP基因啟