LEP基因啟動子區(qū)在不同組織中的甲基化狀態(tài)及代謝手術對其甲基化的影響.pdf

1、目的:肥胖及其合并癥嚴重威脅人類健康，而我國已經(jīng)成為世界第一肥胖大國，阻斷肥胖的流行趨勢是目前臨床研究的熱點。代謝手術已經(jīng)被公認為治療肥胖及其相關合并癥最為長期有效的治療措施，但是臨床上仍有少數(shù)病人對代謝手術的治療反應性不佳，提示在機制和適應證選擇方面仍有研究空間。表觀遺傳學，特別是DNA甲基化在肥胖及相關疾病的發(fā)生和發(fā)展中有重要意義。本研究選取了在肥胖發(fā)生中較為重要的LEP基因，通過研究LEP基因啟動子區(qū)在不同組織中的DNA甲基化水平

2、及其對LEP基因表達的調控情況，以及代謝手術對人體LEP基因啟動子區(qū)DNA甲基化的干預情況，明確LEP基因在肥胖及其相關合并癥的發(fā)生與發(fā)展中的作用，并評估代謝手術對這一基因甲基化的影響，以便為肥胖及代謝綜合征的相關研究提供新的方向。
　　方法:1、選取2014年10月至2015年10月間接受減重手術治療的38名成年肥胖病人以及同期12名非肥胖成人，每名病人分別獲取其外周血、腹部皮下脂肪組織及內臟脂肪組織（大網(wǎng)膜脂肪）標本;2、甲基

3、化特異性PCR法(MS-PCR)對獲得標本中LEP基因啟動子區(qū)的甲基化情況進行分析，比較個體間及組織間差異;3、實時熒光PCR法(qPCR)對LEP基因轉錄情況進行測定，并結合血leptin濃度進行分析，研究LEP基因啟動子區(qū)甲基化對該基因表達以及其產(chǎn)物生成的影響;4、分別對人皮膚成纖維細胞及小鼠脂肪細胞進行去甲基化處理，分別測定兩種細胞去甲基化處理前后LEP基因mRNA的含量，研究去甲基化對LEP基因轉錄的影響;5、對38名接受代謝手

4、術的肥胖患者進行1年的術后隨訪，收集相關術后臨床資料，并對其術后外周血LEP基因啟動子甲基化水平進行研究，明確手術對肥胖病人DNA甲基化水平是否存在影響。
　　結果:1、同一個體內外周血淋巴細胞、皮下脂肪組織及內臟脂肪組織中的LEP基因啟動子區(qū)甲基化水平無顯著差異;2、與體重正常者相比，肥胖患者LEP基因啟動子區(qū)甲基化水平更低(P＜0.001);3、與體重正常者相比，肥胖患者LEP基因mRNA在脂肪組織中水平更高(P＜0.001)

5、;4、經(jīng)去甲基化處理后，人皮膚成纖維細胞及小鼠脂肪細胞中LEP基因轉錄水平均增加;5、38名肥胖患者代謝手術術后1年，多余體重減少58％，胰島素抵抗水平明顯降低，未發(fā)生嚴重并發(fā)癥;6、代謝手術術后患者出現(xiàn)LEP基因啟動子區(qū)甲基化水平上升及血leptin水平降低，與術前相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　結論:1.外周血淋巴細胞LEP基因啟動子區(qū)甲基化水平可以用于衡量脂肪組織中該基因甲基化水平;2.不同個體間特定組織LEP基因啟