中藥香加皮乙酸乙酯提取物抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：研究中藥香加皮提取物的體外抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)作用，分離純化香加皮提取物的抗腫瘤活性成分，主要研究中藥香加皮乙酸乙酯提取物(CPEAE)對人源性食管癌細(xì)胞株和小鼠脾細(xì)胞生長的作用，探討其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期阻滯和提高免疫調(diào)節(jié)力的機(jī)制，為抗腫瘤新藥的開發(fā)、研制提供科學(xué)依據(jù)。 方法：1.應(yīng)用MTT法分析不同濃度的CPEAE對兩種人源性食管癌細(xì)胞TE-13和Eca-109增殖的抑制作用；2.應(yīng)用Gimsa染色法分析TE-13用

2、藥前后的細(xì)胞形態(tài)變化；3.應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測用藥前后TE-13細(xì)胞周期分布和凋亡率的變化；4.應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳檢測用藥前后TE-13細(xì)胞DNA凋亡片段長度和數(shù)量的變化；5.應(yīng)用Western blot方法檢測TE-13細(xì)胞經(jīng)藥物處理前后細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶CDK4、CDK2蛋白表達(dá)水平的變化。6.采用MTT法檢測CPEAE對小鼠脾細(xì)胞、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、細(xì)胞因子分泌功能等的影響。 結(jié)果：1.CPEAE對TE-13和

3、Eca-109兩種細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用(P＜0.01)，CPEAE作用48h時，Eca-109細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)約為15μg/ml，TE-13細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)小于5μg/ml，并且呈時間和濃度依賴性，藥物濃度越大，作用時間越長，對腫瘤細(xì)胞生長的抑制效應(yīng)越強(qiáng)。 2.CPEAE作用于兩種食管癌細(xì)胞后，可誘導(dǎo)較典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化，有的出現(xiàn)核固縮，核碎裂以及凋亡小體等。 3.經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)分

4、析的DNA直方圖上可見CPEAE作用后，TE-13細(xì)胞在G1峰前出現(xiàn)細(xì)胞凋亡峰亞G1期峰，且G0/G1期細(xì)胞增多(P<0.01)，S期期細(xì)胞明顯減少(P<0.01)，G2/M期細(xì)胞沒有明顯變化(P>0.05)。25 μg/ml的CPEAE作用48h后，TE-13的細(xì)胞凋亡率高達(dá)49.2％，未處理組細(xì)胞凋亡率為4.18％； 4.瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，經(jīng)25 μg/ml和12.5 μg/ml的CPEAE處理48小時后，TE-13細(xì)

5、胞DNA降解成寡聚核小體，出現(xiàn)明顯的有規(guī)律的梯形條帶。 5.Western blot結(jié)果顯示CPEAE能降低TE-13細(xì)胞CDK4蛋白的表達(dá)(P<0.01)，對CDK2蛋白的表達(dá)沒有明顯影響(P>0.05)。 6.CPEAE作用后，小鼠的脾的淋巴細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用(P<0.01)，巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的吞噬作用明顯增強(qiáng)(P<0.01)，同時，可提高巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、IL-12等細(xì)胞因子的水平。 結(jié)論：1.C