人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞體外生物安全性探討.pdf

1、目的：
　　 人類間充質(zhì)干細(xì)胞(human mesenchymal stem cells，hMSC)因具有自我更新并分化成為多個胚層不同類型細(xì)胞的潛能，在再生醫(yī)學(xué)和細(xì)胞替代治療中具有重要的作用。體外培養(yǎng)過程中生物安全性的情況是評價hMSC治療前景的重要條件。本實驗探討人皮膚來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(human skin-derived mesenchymal stem cells，HSMSCs)的生物安全性，研究在體外長期培養(yǎng)條件下其

2、致瘤性、染色體核型及主要組織相容性抗原的表達情況，為評估HSMSCs體內(nèi)移植的生物安全性提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.體外長期傳代培養(yǎng)HSMSCs觀察其形態(tài)學(xué)變化，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)對人皮膚來源的基質(zhì)細(xì)胞進行鑒定；
　　 2.流式細(xì)胞儀法(flow cytometer,FCM)通過檢測人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記對其進行鑒定；
　　 3.做染色體核型檢測；
　　 4.通過重癥聯(lián)合免疫缺陷(

3、Severe combined immunodeficiency mice,SCID)小鼠體內(nèi)致腫瘤試驗對HSMSCs的致瘤性進行研究。觀察受體SCID鼠的一般情況，通過病理組織學(xué)分析檢測其成瘤性及植入細(xì)胞對受體各器官的影響；
　　 5.通過RT-PCR和FCM法分別檢測人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞HLA-I、和HLA-DR的基因和蛋白水平的表達情況來檢測其主要組織相容性抗原的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.體外培

4、養(yǎng)的人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞為成纖維樣細(xì)胞、短梭形，細(xì)胞緊密排列呈漩渦狀生長，并且在傳代過程中細(xì)胞形態(tài)保持不變；
　　 2.HSMSCs與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞一樣穩(wěn)定表達特異性標(biāo)志CD73、Vimentin、CD105等，不表達造血系統(tǒng)特異性標(biāo)志CD34、CD45、CD19、CD14等標(biāo)記；
　　 3.體外培養(yǎng)至P11、P21的人皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞核型檢測結(jié)果正常；
　　 4.在SCID鼠植入模型中，植入體外培養(yǎng)至

5、第11、21代的人皮膚間充質(zhì)干細(xì)胞后，受體鼠一般狀況良好，解剖大體觀注射部位及各器官無異常變化，作病理檢測并切片染色，無腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)；
　　 5.體外培養(yǎng)至P21代的人皮膚源性間充質(zhì)干細(xì)胞RT-PCR檢測表明不同代數(shù)HLA-I、HLA-DR在mRNA水平均有表達，而流式法檢測表明蛋白水平HLA-DR均為陰性表達，而HLA-I在不同代數(shù)表達不一致，P10、P11均穩(wěn)定陽性表達率為29.5％～31.7％，P21為陰性表達。