人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源exosomes的安全性評價.pdf

1、背景目的：臨床Ⅰ期和Ⅱ期實驗已經(jīng)證實間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)可以對急性心肌梗死(AMI)進(jìn)行損傷修復(fù)，但是由于MSCs存在移植存活率低、加重狹窄及致瘤性安全隱患等不足使得其在臨床上的應(yīng)用受到限制。越來越多的證據(jù)表明，以MSCs旁分泌來源的exosomes(MSC-exosomes)為基礎(chǔ)的移植比MSCs本身更具有潛在的保護(hù)作用和修復(fù)效果。但是，MSC-exosomes的應(yīng)用是否安全可靠還尚不清楚。在本實驗中，我們采用了多種動物模型，比較

2、全面地評估了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的exosomes(hucMSC-exosomes)的安全性。
　　方法：取來自健康家兔的心臟血液，去除纖維蛋白原后，取沉淀的紅細(xì)胞(RBC)用生理鹽水配制成2％的RBC懸液，與hucMSC-exosomes37℃共溫浴，在3h內(nèi)觀察其溶血和RBC沉降情況；分別將hucMSC-exosomes沿耳緣靜脈和股四頭肌注入家兔體內(nèi)，觀察血管充血是否正常，周圍組織有無腫脹，注射點肌纖維橫紋是否清晰，肌間有

3、無出血，有無炎性細(xì)胞浸潤等病理變化，并取注射點部位血管、肌肉及周圍組織做組織學(xué)切片，采用蘇木精-伊紅(H&E)染色的方法，綜合評價hucMSC-exosomes是否具有刺激性；對豚鼠腹腔注射 hucMSC-exosomes，每隔一天致敏1次，第3次致敏14天后進(jìn)行末次致敏，觀察并記錄豚鼠的過敏癥狀以及癥狀所出現(xiàn)的時間，綜合評價 hucMSC-exosomes是否含有過敏原；將hucMSC-exosomes沿耳緣靜脈輸注入家兔體內(nèi)，每隔一

4、小時測定1次肛溫，總共3次，根據(jù)溫度的變化程度來分析其是否含有致熱源；取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，尾靜脈注射hucMSC-exosomes，定期采血并測定hucMSC-exosomes對血常規(guī)指標(biāo)的影響；為了評價hucMSC-exosomes在體內(nèi)的安全性，我們建立了SD大鼠的AMI模型，分別選取400μg和800μg劑量的hucMSC-exosomes沿尾靜脈注射入大鼠體內(nèi)，每天1次，連續(xù)7天，之后密切觀察SD大鼠

5、的生長情況，并定期對其稱重采血，檢測hucMSC-exosomes對肝功能及腎功能是否有不良影響。結(jié)果：hucMSC-exosomes不會引起溶血反應(yīng)，對注射點的血管、肌肉及周圍組織都沒有刺激性，不含有過敏原和致熱源，對血常規(guī)指標(biāo)沒有不良影響，對 AMI模型的大鼠體重的降低有一定的緩解作用并且對肝功能、腎功能都沒有副作用，各項結(jié)果都顯示hucMSC-exosomes是安全可靠可以被應(yīng)用的。
　　結(jié)論：hucMSC-exosomes