淋巴細(xì)胞凋亡異常在特發(fā)性血小板減少性紫癜中的作用.pdf

1、特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura，ITP)是一種常見(jiàn)的自身免疫性疾病，臨床上按照病程是否超過(guò)6個(gè)月分為急性型(AITP)和慢性型(CITP)兩種，兒童時(shí)期以AITP多見(jiàn)，其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明。近年來(lái)研究表明ITP患者體內(nèi)激活的淋巴細(xì)胞凋亡不足可能在疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞按既定程序主動(dòng)結(jié)束生命的一種死亡形式，它主要是由死亡受體信號(hào)(主要是Fa

2、s/FasL系統(tǒng))調(diào)控的細(xì)胞外凋亡途徑和由Bcl-2基因家族調(diào)控的細(xì)胞內(nèi)凋亡途徑調(diào)節(jié)的。干預(yù)淋巴細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)過(guò)程可以通過(guò)誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞凋亡而起到治療作用，因而針對(duì)ITP時(shí)凋亡調(diào)控系統(tǒng)各環(huán)節(jié)的研究有重要意義。本實(shí)驗(yàn)旨在探討AITP患兒外周血淋巴細(xì)胞凋亡率與凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Bcl-2/Bax比值及其與血小板計(jì)數(shù)的關(guān)系，以進(jìn)一步了解ITP的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供理論依據(jù)。 材料與方法： 1.對(duì)象：選擇鄭州大學(xué)第一

3、附屬醫(yī)院2005年3月～8月兒科門診及病房的AITP患兒25例，其中男17例，女8例，年齡1.2歲～11歲(平均4.3歲)，診斷均符合急性特發(fā)性血小板減少性紫癜診斷標(biāo)準(zhǔn)。另選擇健康體檢兒童15例作為對(duì)照組，其中男8例，女7例，年齡3～10歲(平均5.6歲)。 2.淋巴細(xì)胞的分離及涂片的制備：治療前的AITP患兒及體檢兒童各采靜脈血4ml，以EDTA抗凝，等量PBS液混勻，緩慢平鋪于Ficoll淋巴細(xì)胞分離液(二者比例為2：1)表

4、面，以2000r/min速度離心20分鐘，分離出淋巴細(xì)胞，用PBS液洗滌兩次，制成細(xì)胞懸液，涂片備用。 3.淋巴細(xì)胞凋亡率檢測(cè)：用原位細(xì)胞凋亡方法(TUNEL法)檢測(cè)淋巴細(xì)胞凋亡率，顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，得到淋巴細(xì)胞凋亡百分率。 4.凋亡蛋白Bcl-2及Bax陽(yáng)性表達(dá)率檢測(cè)：用免疫組化方法檢測(cè)凋亡蛋白Bcl-2及Bax陽(yáng)性率，顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞，得到凋亡蛋白Bcl-2和Bax陽(yáng)性表達(dá)率。 5.統(tǒng)

5、計(jì)學(xué)分析：全部數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，AITP患兒與正常對(duì)照組采用成組設(shè)計(jì)的t檢驗(yàn)，兩變量相關(guān)關(guān)系采用直線相關(guān)分析。以P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果： 1.外周血淋巴細(xì)胞凋亡率：AITP患兒治療前外周血淋巴細(xì)胞凋亡率為(3.70±0.74)％，正常對(duì)照組偶見(jiàn)凋亡淋巴細(xì)胞。 2.外周血淋巴細(xì)胞Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較：AITP患兒外周血淋巴細(xì)

6、胞Bcl-2蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為(59.02±3.99)％，正常對(duì)照組為(17.12±3.15)％，AITP患兒明顯高于正常對(duì)照組(t=34.606，P=0.000)。 3.外周血淋巴細(xì)胞Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)率的比較：AITP患兒外周血淋巴細(xì)胞Bax蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為(8.39±1.74)％，正常對(duì)照組為(9.92±1.83)％，AITP患兒較正常對(duì)照組減低(t=2.638，P=0.012)。 4.外周血淋巴細(xì)胞Bcl-2/Ba

7、x比值的比較：AITP忠兒外周血淋巴細(xì)胞Bcl-2/Bax比值為(7.40±1.88)，正常對(duì)照組為(1.84±0.69)，AITP患兒顯著高于正常對(duì)照組(t=10.991，P=0.000)。 5.相關(guān)性分析：AITP患兒淋巴細(xì)胞凋亡率與血小板計(jì)數(shù)呈明顯對(duì)數(shù)正相關(guān)(r=0.598，P=0.002)，AITP患兒淋巴細(xì)胞凋亡率與Bcl-2蛋白陽(yáng)性率呈明顯負(fù)相關(guān)r=-0.812，P=0.000)，與Bax蛋白呈明顯正相關(guān)(r=0.8

8、08，P=0.000)，與Bcl-2/Bax比值呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.799，P=0.000)。 結(jié)論： 1.AITP患兒體內(nèi)活化的淋巴細(xì)胞凋亡減少，導(dǎo)致大量活化淋巴細(xì)胞存留體內(nèi)，其中的B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生抗血小板抗體，破壞血小板，而T淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生細(xì)胞因子導(dǎo)致免疫功能紊亂，加重自身免疫病。 2.AITP患兒外周血淋巴細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)增高，Bax蛋白表達(dá)減低，Bcl-2/Bax比值升高，抑凋亡蛋白表達(dá)的增高和