人類基因CXCR4、arresten的克隆、表達(dá)和arresten生物活性分析.pdf

1、趨化因子及其受體是腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的重要調(diào)節(jié)因素。趨化因子和受體的結(jié)合激活細(xì)胞內(nèi)G蛋白和磷脂酶C，通過(guò)刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、趨化腫瘤細(xì)胞的定向遷移、增加腫瘤細(xì)胞的抗逆性和與胞外基質(zhì)的黏附性等直接或間接作用促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。 人趨化因子受體CXCR4在腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子SDF-1是其特異性配體。SDF-1與CXCR4的相互作用與多種腫瘤的黏附、擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移、入侵行為密切相關(guān)。制備CXCR4抗體對(duì)研究CXCR4的生

2、物學(xué)功能和腫瘤治療有重要意義。為了原核表達(dá)CXCR4并制備其抗體，將構(gòu)建的pGEX-4T1-CXCR4重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌E.coliBL21(DE3)，誘導(dǎo)表達(dá)后發(fā)現(xiàn)，CXCR4全蛋白對(duì)大腸桿菌細(xì)胞有毒性作用，無(wú)法進(jìn)行原核表達(dá)，但CXCR4主要配體結(jié)合部位N端肽段(1-42aa)在同一原核表達(dá)系統(tǒng)中能夠高效可溶性表達(dá)。分別用親和層析法和硫酸銨沉淀法對(duì)重組CXCR4N端肽段進(jìn)行純化，得到純度為80％的重組CXCR4N端肽段，為下一步篩選

3、CXCR4特異性抗體奠定了基礎(chǔ)。 惡性腫瘤的無(wú)限制侵襲性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成(angiogenesis)，許多研究表明，抑制血管生成能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移。因此，抗血管生成有望成為一種新型的腫瘤療法。 arresten是新發(fā)現(xiàn)的一種強(qiáng)有效的血管生成抑制因子，是Ⅳ型膠原蛋白a1鏈的羧基末端非膠原區(qū)-1多肽片段，研究發(fā)現(xiàn)arresten能有效抑制新生血管形成及腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。為進(jìn)一步研究arresten的生物學(xué)