用于逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥性的多模式膠束的研究.pdf

1、腫瘤的臨床治療中，化療是最常應用的手段。然而，腫瘤細胞會對化療藥物產(chǎn)生耐藥性，嚴重影響化療的成功率和有效性。順鉑（cisplatin）是臨床應用中常見的化療藥物之一，它具有廣譜抗癌性質(zhì)，但極易產(chǎn)生腫瘤耐藥性。光熱治療（photothermal therapy，PTT）是近年來快速發(fā)展的一種新型的非侵入性腫瘤局部治療方法，它利用光吸收劑（如碳菁染料吲哚菁綠及其衍生物Cypate）將近紅外光轉(zhuǎn)變?yōu)闊幔率菇M織變性壞死，實現(xiàn)腫瘤消融治療。更為

2、重要的是，光熱治療中的高溫可通過誘導細胞內(nèi)蛋白質(zhì)變性、抑制DNA修復、擾亂細胞內(nèi)信號通路等方式，降低腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性。因此，本課題構建了同時攜載順鉑前藥和光吸收劑Cypate的多模式聚合物膠束，利用腫瘤的滲透滯留效應（enhanced permeability and retention effect，EPR效應），實現(xiàn)膠束在腫瘤部位的被動靶向，通過化療和光熱治療的協(xié)同治療，克服腫瘤耐藥性，實現(xiàn)腫瘤消融治療。
　　方法：

3、
　?。?）順鉑前藥（c,t,c-[Pt(NH3)2(CO2CH2CH2CH2CH2CH3)2Cl2]，Pt(IV)）通過 c,t,c-[Pt(NH3)2Cl2(OH)2]與正己酸酐反應制得。
　?。?）采用兩親性嵌段共聚物聚乙二醇-聚天冬氨酸（PEG-PAsp）作為載體，以薄膜分散法制備載Pt(IV)和Cypate的聚合物膠束（P/C-Micelles），并考察膠束的載藥量；通過掃描電鏡和透射電鏡觀察膠束的形態(tài)特征，采用動

4、態(tài)光散射粒度儀測定粒徑分布，應用紫外分光光度法測定其載藥量和包封率。
　?。?）通過MTT法比較不同濃度的P/C-Micelles對A549細胞及其順鉑耐藥株（A549R）的光熱細胞毒性。
　?。?）應用紫外分光光度法測定A549及A549R細胞對P/C-Micelles的攝取量。
　?。?）采用 DPBF（1,3-Diphenylisobenzofuran）探針、DHE（Dihydroethidium）和吖啶橙（Ac

5、ridine Orange，AO）染色驗證低濃度的P/C-Micelles經(jīng)過激光照射后在細胞內(nèi)可產(chǎn)生單線態(tài)氧。
　?。?）通過小動物成像系統(tǒng)考察P/C-Micelles在荷瘤小鼠體內(nèi)的近紅外光熒光成像性質(zhì)和組織分布。
　?。?）通過抑瘤實驗考察P/C-Micelles在近紅外光照射下對A549和A549R荷瘤小鼠腫瘤治療效果，評價化療和光熱治療在對抗腫瘤耐藥性中的協(xié)同效應。
　　結果：正己酸與四價順鉑的反應產(chǎn)率較高（

6、85％），合成的順鉑前藥Pt(IV)具有良好的疏水性和穩(wěn)定性。載藥膠束P/C-Micelles呈球形，平均粒徑為81.6±5.1 nm、載藥量為20.3±3.1%，能顯著增強Cypate的光穩(wěn)定性。P/C-Micelles在近紅外光（785 nm，1.5 W/cm2）照射下具有明顯的光熱升溫效應，當膠束中Cypate濃度為2.0μg/mL時，可在300 s內(nèi)即可將溫度提高23℃；光熱效應還具有明顯的Cypate濃度依賴性。體外細胞實驗證

7、實Cypate在較低濃度時可產(chǎn)生單線態(tài)氧，從而誘導溶酶體膜的破裂，從而有效增加藥物的胞內(nèi)轉(zhuǎn)運。在近紅外光照條件下，P/C-Micelles對A549細胞和A549R耐藥細胞有顯著的光熱細胞損傷及細胞毒性效應，耐藥株A549R的耐藥指數(shù)由4.17降低為1.72，表明膠束具有明顯的協(xié)同效應，可以克服腫瘤耐藥性。在近紅外光（785 nm，1.5 W/cm2）照射下，P/C-Micelles對A549R和A549荷瘤小鼠的腫瘤生長均具有顯著的抑

8、制作用，并可實現(xiàn)腫瘤消融。
　　結論：
　　本課題成功制備了載Pt(IV)和Cypate的多模式膠束P/C-Micelles，該膠束具有較好的穩(wěn)定性和光熱升溫效應，在近紅外光照下可顯著提高對耐藥性腫瘤細胞A549R的細胞毒性。動物實驗表明，P/C-Micelles具有較好的腫瘤被動靶向性，P/C-Micelles可通過化療與光熱治療的協(xié)同效應有效對抗腫瘤耐藥性，實現(xiàn)耐藥性腫瘤的消融治療。本課題提出了通過光熱、化療的協(xié)同效應抑