Wiskott-Aldrich綜合征10例臨床與分子特點(diǎn)分析.pdf

1、目的: 探討10例Wiskott-Aldrich綜合癥（Wiskott-Aldrich syndrome，WAS）患兒的臨床、免疫學(xué)和分子生物學(xué)特點(diǎn)。 方法: 1.對2007-2009年在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診斷的10例WAS患兒進(jìn)行臨床資料總結(jié)及臨床表型評分。 2.對患兒進(jìn)行血常規(guī)、免疫球蛋白、淋巴細(xì)胞分類、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)換率、硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)（NBT）及骨髓常規(guī)檢查。 3.收集10例患兒及

2、家庭成員新鮮全血標(biāo)本。 4.Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離患兒及親屬外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），送重慶醫(yī)科大學(xué)電鏡室行淋巴細(xì)胞掃描電鏡（SEM）檢查。 5.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry，F(xiàn)CM）檢測10例患兒及父母PBMCs中WAS蛋白（Wiskott-Aldrich syndrome protein，WASP）表達(dá)。 6.提取患兒總RNA，RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，提取患

3、兒及親屬基因組DNA，用于WASP基因的擴(kuò)增。 7.PCR擴(kuò)增WASP cDNA，12個(gè)外顯子及內(nèi)含子交接區(qū)域。瓊脂糖膠回收純化PCR產(chǎn)物直接進(jìn)行雙向測序，將測序結(jié)果與GeneBank的WASP基因序列進(jìn)行比對，經(jīng)RT-PCR發(fā)現(xiàn)突變后進(jìn)一步行DNA分析明確。 結(jié)果: 1.本組均男性，多以自幼大便帶血絲及皮膚瘀點(diǎn)瘀斑起病，均有血小板減少伴小血小板，濕疹和免疫缺陷表現(xiàn)，為典型WAS。2例發(fā)生自身免疫性溶血性貧血（A

4、IHA），1例患視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤（RB），評5分。3例分別發(fā)生嚴(yán)重感染和濕疹評4分，4例評3分。 2.具有陽性家族史患兒臨床診斷年齡（9個(gè)月）明顯早于無家族史者（12.9個(gè)月）。 3.多數(shù)患兒IgA（8/9）、IgE（8/9）和IgG（7/9）升高，除6例CD4+T比例下降（6/9），其余患兒淋巴細(xì)胞亞群分類正常。1例淋巴細(xì)胞增殖功能降低（1/3），2例NBT下降（2/5）。 4.6例患兒行骨髓細(xì)胞學(xué)檢查，其結(jié)果缺

5、乏特征性改變。 5.5例患兒行SEM可見典型淋巴細(xì)胞微絨毛改變。 6.10例患兒PBMCs均無WASP表達(dá)。 7.9例行WASP基因突變分析共發(fā)現(xiàn)7種不同突變，3例為新型突變（*），8例位于編碼區(qū)，1例位于內(nèi)含子。4例突變位于EVH1區(qū)，2例BR區(qū)，1例VCA區(qū)，1例GBD區(qū)。突變類型包括無義突變4例（2例155 C>T，R41 X；2例665 C>T，R211X），錯(cuò)義突變2例（*168C>A，T45K；148

6、7 G>A，D485N/5'剪切），缺失突變1例（*747-748del T，I238 Fs X260），拼接位點(diǎn)突變l例（Ivs9+2 T>C），插入突變1例（*253 Ins A，C73X）。8例患兒母親為突變攜帶者。 8.除預(yù)防性抗生素及靜注丙球（IVIG），3例接受造血干細(xì)胞移植（HSCT），移植后2例正常表達(dá)WASP，1例死于巨細(xì)胞病毒（CMV）所致的肺間質(zhì)性病變。 結(jié)論: 早發(fā)持續(xù)血小板減少伴血小板體