一例Wiskott-Aldrich綜合征回復(fù)突變患兒免疫功能和臨床癥狀分析.pdf

1、目的：分析一例 Wiskott-Aldrich綜合征回復(fù)突變患兒基因型、WASp細胞表達譜系及其與免疫功能和臨床表現(xiàn)之間的可能關(guān)系。
　　方法：患兒男，現(xiàn)13歲，出生時發(fā)現(xiàn)濕疹、血小板減少及反復(fù)感染。5歲時外院診斷為Wiskott-Aldrich綜合征。2009年因血小板減少伴全身反復(fù)出血第一次就診于我院。2010年第二次來我院檢查，經(jīng)WASp流式細胞術(shù)分析、WASp基因分析及T-A克隆后序列分析證實為WASp基因回復(fù)突變患兒。對

2、患兒不同年齡時采集的標(biāo)本，采用磁珠或流式細胞術(shù)分選骨髓及外周血各種細胞亞群，采用流式細胞術(shù)檢測WASp，進行WAS基因分析；采用Spetratyping法分析T細胞抗原受體多樣性，采用細胞內(nèi)細胞因子染色分析T細胞免疫功能。
　　結(jié)果：經(jīng)頰粘膜刮片采集細胞進行DNA序列分析證實該患兒生殖細胞水平突變?yōu)閃ASp基因無義突變（155C>T）。患兒幼年時為典型WAS患兒，家系中有因WAS早年病死成員?；純褐?0歲時，臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，外周

3、血細胞部分表達 WASp，經(jīng)過基因序列分析及 PCR產(chǎn)物TA克隆后基因分析，證實該患兒發(fā)生回復(fù)突變。此后分別于2011年和2012年分析外周血各群細胞表達 WASp水平，發(fā)現(xiàn)2011年CD3+CD4-CD8+T細胞部分表達WASp（74.44％），CD3+CD4+CD8-T細胞WASp表達陰性，CD19+B細胞WASp表達陰性，CD56+NK細胞部分表達WASp（93.71%）。CD4+T細胞產(chǎn)生細胞因子能力與正常對照無差別。骨髓中CD

4、34+細胞WASp表達陰性，CD34-細胞部分表達WASp，CD42b+巨核細胞部分表達WASp（42.31%）。2012年（患兒12歲時）外周血中CD3+CD4-CD8+T細胞部分表達WASp（39.16%）， CD3+CD4+CD8-T細胞部分表達WASp（15.3%），CD56+NK細胞部分表達WASp（47.65%），而CD19+B細胞仍不表達WASp。三次TCRVβ多樣性檢測結(jié)果無明顯差別。
　　結(jié)論：（1）WAS基因回

5、復(fù)突變可使部分細胞表達WASp蛋白，感染、濕疹等臨床癥狀明顯改善，但血小板減少和自身免疫病發(fā)病風(fēng)險并無明顯變化，提示W(wǎng)ASp基因回復(fù)突變僅能部分修復(fù)免疫功能。（2） WAS基因回復(fù)突變后各種外周血細胞譜系表達WASp的種類和水平是可變的，這種變異似乎與臨床表現(xiàn)之間無關(guān)。（3）具有原發(fā)突變，不表達WASp的各種免疫細胞和發(fā)生回復(fù)突變，不表達WASp的免疫細胞之間是否發(fā)生相互作用，是否對免疫功能有重要影響，是否更易導(dǎo)致自身免疫性疾病等問題尚