檢測鴨源沙門氏菌抗體間接ELISA方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、本文以鴨源沙門氏菌作為研究對象，成功建立了以鴨源沙門氏菌裂解抗原為包被抗原的間接ELISA方法，并應(yīng)用于監(jiān)測鴨源沙門氏菌蜂膠滅活苗免疫鴨血清抗體的消長變化，為疫苗質(zhì)量的評估和制定合理的免疫程序提供技術(shù)支持。
　　試驗以鴨源沙門氏菌超聲波裂解物為包被抗原，經(jīng)ELISA各反應(yīng)條件的優(yōu)化，包括反應(yīng)板均一性測定，羊抗鴨IgG-HRP工作濃度的篩選，抗原最適包被濃度和血清最佳稀釋度的選擇，抗原包被時間篩選，封閉時間的篩選，陰、陽性血清反應(yīng)時

2、間的篩選，酶標(biāo)二抗的作用時間的篩選，底物顯色時間的篩選，確定了間接ELISA操作程序:裂解抗原稀釋20倍(19.51μg/ml)37℃包被2 h;1％牛血清白蛋白封閉液37℃封閉1 h;待測血清（待測抗體）稀釋200倍37℃與裂解抗原作用1 h;酶標(biāo)二抗稀釋400倍，37℃作用1 h;37℃避光顯色15 min;避光加入終止液2 mol/L H25O4，終止反應(yīng);酶聯(lián)儀檢測OD450值，判定結(jié)果陰陽性，成功建立了檢測鴨源沙門氏菌抗體的間

3、接ELISA方法;通過特異性試驗、敏感性試驗、重復(fù)性試驗，結(jié)果表明對鴨瘟病毒、鴨肝炎病毒、鴨疫里默氏桿菌、鴨大腸桿菌、葡萄球菌、腺病毒的鴨陽性血清的檢測結(jié)果為陰性;阻斷效果明顯;靈敏性好，為試管凝集的64倍以上;板內(nèi)和板間變異系數(shù)分別在1.46％～3.12％和1.30％～3.17％之間，均小于5％，說明重復(fù)性好。
　　試驗采集鴨源沙門氏菌蜂膠滅活苗免疫雛鴨一免后5、10、15、20、25、35d，二免后5、10、15、25 d的血