添加擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)的沙門(mén)氏菌PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、沙門(mén)氏菌是人類食源性疾病的重要病原細(xì)菌,也是引起食物中毒最為常見(jiàn)的病原菌之一。在全球范圍內(nèi),因沙門(mén)氏菌引發(fā)的食物中毒事件發(fā)生頻繁,且影響范圍廣,造成巨大的安全隱患。因此提高沙門(mén)氏菌檢測(cè)技術(shù)顯更為重要,尤其是快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)技術(shù)。目前,PCR檢測(cè)技術(shù)以其檢測(cè)操作方法簡(jiǎn)單、檢測(cè)周期短、特異性好等特點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于在食品中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)。但近來(lái)一些應(yīng)用實(shí)踐表明,PCR檢測(cè)方法存在一些不足,其檢測(cè)結(jié)果會(huì)存在假陰性現(xiàn)象,造成漏檢。因此,可以有效的減

2、少或消除PCR檢測(cè)可能存在的假陰性問(wèn)題,成為近來(lái)研究的熱點(diǎn)。
　　本課題針對(duì)沙門(mén)氏菌PCR檢測(cè)易出現(xiàn)假陰性現(xiàn)象,利用復(fù)合引物法構(gòu)建擴(kuò)增內(nèi)標(biāo),建立添加內(nèi)標(biāo)的沙門(mén)氏菌 PCR檢測(cè)方法,并對(duì)人工污染蛋液、105份樣品進(jìn)行檢測(cè)來(lái)驗(yàn)證其應(yīng)用于食品樣品檢測(cè)的效果。主要結(jié)論如下:
　　1)針對(duì)沙門(mén)氏菌invA基因,成功設(shè)計(jì)并經(jīng)PCR反應(yīng)驗(yàn)證的一對(duì)沙門(mén)氏菌特異性PCR檢測(cè)引物,建立并優(yōu)化PCR反應(yīng)體系。
　　2)利用復(fù)合引物法成功構(gòu)建