APE1在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及其與鉑類化療敏感性的關(guān)系.pdf

1、非小細(xì)胞肺癌(Non-small-celllungcancer,NSCLC)約占肺癌的80％，已經(jīng)成為全球第一癌癥殺手。晚期NSCLC的化療主要是以鉑類為主，多采用鉑類加泰素(paclitaxel)，泰素帝(docetaxel)，健擇(gemcitabine)或去甲長(zhǎng)春花堿(NVB)為主的聯(lián)合化療方案。但是這幾種聯(lián)合化療方案臨床療效并沒有顯著差異，表明以鉑類為主的化療目前已經(jīng)達(dá)到瓶頸。為了突破NSCLC的化療瓶頸，進(jìn)一步探討鉑類抗癌作用

2、機(jī)制及其耐藥機(jī)制具有非常重要的臨床意義。研究表明，鉑類抗癌作用的主要靶點(diǎn)為DNA，阻止其復(fù)制及轉(zhuǎn)錄，造成細(xì)胞死亡。鉑類耐藥的機(jī)制仍未完全闡明，可能是由多種因素引起，包括藥物積聚減少；藥物解毒增加(如谷胱甘肽和金屬硫蛋白)；DNA修復(fù)能力增強(qiáng)及順鉑-DNA加合物增加等。 DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)作為機(jī)體抵抗各種損傷的分子基礎(chǔ)，對(duì)于維護(hù)基因組的穩(wěn)定與完整起著至關(guān)重要的作用，然而對(duì)于通過損傷DNA殺死癌細(xì)胞的鉑類化療，這一過程無疑削弱了治療

3、效果。因此，DNA修復(fù)能力增強(qiáng)可能是鉑類耐藥的主要機(jī)制之一。DNA損傷修復(fù)基因脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(apurinic/apyrimidinicendonuclease,APE1)具有核酸內(nèi)切酶及氧化還原雙功能，是細(xì)胞放射性損傷和基因毒性藥物烷化劑致傷的重要修復(fù)因子，并通過氧化還原機(jī)制調(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)錄因子及下游靶基因表達(dá)，而這些轉(zhuǎn)錄因子與腫瘤放化療抵抗密切相關(guān)。因此本研究檢測(cè)NSCLC患者APE1蛋白的表達(dá)特點(diǎn)，分析APE1與NSCLC術(shù)

4、后復(fù)發(fā)和鉑類化療敏感性的關(guān)系，并用Ad5/F35-APE1siRNA重組腺病毒載體特異性“敲除”APE1基因表達(dá)，研究其體外對(duì)NSCLC細(xì)胞順鉑化療敏感性的影響。 研究目的： 1、研究APE1蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織細(xì)胞中表達(dá)情況，分析APE1表達(dá)特點(diǎn)與NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)和鉑類抵抗的關(guān)系，以確證APE1為NSCLC治療有效的靶基因。 2、探討誘導(dǎo)APE1基因沉默對(duì)NSCLC含鉑類化療的增敏作用。 研究?jī)?nèi)容和

5、方法： 1、APE1蛋白在NSCLC細(xì)胞中的表達(dá)特點(diǎn)及NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)和含鉑類藥物抵抗的關(guān)系收集臨床NSCLC患者的病理標(biāo)本及完整臨床病歷資料，并且設(shè)計(jì)隨訪問卷；同時(shí)采用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)NSCLC患者組織標(biāo)本中APE1蛋白的表達(dá)，并分析其表達(dá)與NSCLC臨床分型、術(shù)后復(fù)發(fā)和含鉑類藥物化療等的關(guān)系； 2、Ad5/F35-APE1siRNA重組腺病毒增強(qiáng)肺腺癌順鉑化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究不同劑量順鉑和/或Ad5/F35-APE

6、1siRNA重組腺病毒處理A549細(xì)胞，MTT法檢測(cè)其存活率的改變；TUNEL法檢測(cè)A549細(xì)胞凋亡；Westernblot檢測(cè)APE1蛋白表達(dá)。 研究結(jié)果： 1、APE1蛋白在NSCLC組織細(xì)胞的表達(dá)特點(diǎn)及NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)和含鉑類藥物抵抗的關(guān)系正常肺組織及肺癌組織均有APE1表達(dá)，但正常肺組織以胞核表達(dá)為主，肺癌組織主要在胞漿表達(dá)；APE1的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織類型無明顯關(guān)系；APE

7、1高表達(dá)組和APE1低表達(dá)組患者的1年生存率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=53.03，P＞0.05)，而前者的2年和3年生存率低于后者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。24例鉑類敏感組中，APE1強(qiáng)表達(dá)僅為2例，占8.33％，12例鉑類耐藥組APE1表達(dá)強(qiáng)陽(yáng)性為10例，占83.33％，兩兩比較均有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.06,P＜0.01)。APE1基因檢測(cè)有助于NSCLC療效及預(yù)后的判斷。 2、Ad5/F35-APE1siRNA重

8、組腺病毒顯著增強(qiáng)肺腺癌細(xì)胞順鉑化療敏感性順鉑呈劑量依賴性誘導(dǎo)A549細(xì)胞APE1蛋白表達(dá)增強(qiáng)，Ad5/F35-APE1siRNA能顯著抑制A549細(xì)胞APE1蛋白表達(dá)，且呈劑量依賴性。感染Ad5/F35-APE1siRNA腺病毒比感染對(duì)照腺病毒的A549細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性明顯增強(qiáng)，IC50分別為0.26μg/ml和1.54μg/ml。Ad5/F35-APE1siRNA加強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)的A549細(xì)胞凋亡。 結(jié)論： 1、APE1

9、胞漿異位表達(dá)可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，同時(shí)APE1的表達(dá)強(qiáng)度與含鉑類藥物抵抗相關(guān)。APE1是非小細(xì)胞肺癌治療潛在的分子靶點(diǎn)，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。 2、鉑類化療藥物處理后肺癌細(xì)胞APE1蛋白表達(dá)水平明顯升高，表明化療藥物在殺傷癌細(xì)胞的同時(shí)，癌細(xì)胞合成表達(dá)APE1增強(qiáng)DNA損傷修復(fù)，這可能是NSCLC癌細(xì)胞發(fā)生耐藥的機(jī)制之一。 3、阻斷NSCLC細(xì)胞APE1基因表達(dá)，可顯著提高NSCLC細(xì)胞化療敏感性，誘