APE1在非小細胞肺癌的表達及其與鉑類化療敏感性的關(guān)系.pdf

1、非小細胞肺癌(Non-small-celllungcancer,NSCLC)約占肺癌的80％，已經(jīng)成為全球第一癌癥殺手。晚期NSCLC的化療主要是以鉑類為主，多采用鉑類加泰素(paclitaxel)，泰素帝(docetaxel)，健擇(gemcitabine)或去甲長春花堿(NVB)為主的聯(lián)合化療方案。但是這幾種聯(lián)合化療方案臨床療效并沒有顯著差異，表明以鉑類為主的化療目前已經(jīng)達到瓶頸。為了突破NSCLC的化療瓶頸，進一步探討鉑類抗癌作用

2、機制及其耐藥機制具有非常重要的臨床意義。研究表明，鉑類抗癌作用的主要靶點為DNA，阻止其復(fù)制及轉(zhuǎn)錄，造成細胞死亡。鉑類耐藥的機制仍未完全闡明，可能是由多種因素引起，包括藥物積聚減少；藥物解毒增加(如谷胱甘肽和金屬硫蛋白)；DNA修復(fù)能力增強及順鉑-DNA加合物增加等。 DNA損傷修復(fù)系統(tǒng)作為機體抵抗各種損傷的分子基礎(chǔ)，對于維護基因組的穩(wěn)定與完整起著至關(guān)重要的作用，然而對于通過損傷DNA殺死癌細胞的鉑類化療，這一過程無疑削弱了治療

3、效果。因此，DNA修復(fù)能力增強可能是鉑類耐藥的主要機制之一。DNA損傷修復(fù)基因脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(apurinic/apyrimidinicendonuclease,APE1)具有核酸內(nèi)切酶及氧化還原雙功能，是細胞放射性損傷和基因毒性藥物烷化劑致傷的重要修復(fù)因子，并通過氧化還原機制調(diào)節(jié)多種轉(zhuǎn)錄因子及下游靶基因表達，而這些轉(zhuǎn)錄因子與腫瘤放化療抵抗密切相關(guān)。因此本研究檢測NSCLC患者APE1蛋白的表達特點，分析APE1與NSCLC術(shù)

4、后復(fù)發(fā)和鉑類化療敏感性的關(guān)系，并用Ad5/F35-APE1siRNA重組腺病毒載體特異性“敲除”APE1基因表達，研究其體外對NSCLC細胞順鉑化療敏感性的影響。 研究目的： 1、研究APE1蛋白在非小細胞肺癌組織細胞中表達情況，分析APE1表達特點與NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)和鉑類抵抗的關(guān)系，以確證APE1為NSCLC治療有效的靶基因。 2、探討誘導(dǎo)APE1基因沉默對NSCLC含鉑類化療的增敏作用。 研究內(nèi)容和

5、方法： 1、APE1蛋白在NSCLC細胞中的表達特點及NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)和含鉑類藥物抵抗的關(guān)系收集臨床NSCLC患者的病理標(biāo)本及完整臨床病歷資料，并且設(shè)計隨訪問卷；同時采用免疫細胞化學(xué)檢測NSCLC患者組織標(biāo)本中APE1蛋白的表達，并分析其表達與NSCLC臨床分型、術(shù)后復(fù)發(fā)和含鉑類藥物化療等的關(guān)系； 2、Ad5/F35-APE1siRNA重組腺病毒增強肺腺癌順鉑化療敏感性的實驗研究不同劑量順鉑和/或Ad5/F35-APE

6、1siRNA重組腺病毒處理A549細胞，MTT法檢測其存活率的改變；TUNEL法檢測A549細胞凋亡；Westernblot檢測APE1蛋白表達。 研究結(jié)果： 1、APE1蛋白在NSCLC組織細胞的表達特點及NSCLC術(shù)后復(fù)發(fā)和含鉑類藥物抵抗的關(guān)系正常肺組織及肺癌組織均有APE1表達，但正常肺組織以胞核表達為主，肺癌組織主要在胞漿表達；APE1的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織類型無明顯關(guān)系；APE

7、1高表達組和APE1低表達組患者的1年生存率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=53.03，P＞0.05)，而前者的2年和3年生存率低于后者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。24例鉑類敏感組中，APE1強表達僅為2例，占8.33％，12例鉑類耐藥組APE1表達強陽性為10例，占83.33％，兩兩比較均有有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=9.06,P＜0.01)。APE1基因檢測有助于NSCLC療效及預(yù)后的判斷。 2、Ad5/F35-APE1siRNA重

8、組腺病毒顯著增強肺腺癌細胞順鉑化療敏感性順鉑呈劑量依賴性誘導(dǎo)A549細胞APE1蛋白表達增強，Ad5/F35-APE1siRNA能顯著抑制A549細胞APE1蛋白表達，且呈劑量依賴性。感染Ad5/F35-APE1siRNA腺病毒比感染對照腺病毒的A549細胞對順鉑的敏感性明顯增強，IC50分別為0.26μg/ml和1.54μg/ml。Ad5/F35-APE1siRNA加強順鉑誘導(dǎo)的A549細胞凋亡。 結(jié)論： 1、APE1

9、胞漿異位表達可能與非小細胞肺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)，同時APE1的表達強度與含鉑類藥物抵抗相關(guān)。APE1是非小細胞肺癌治療潛在的分子靶點，具有重要的臨床應(yīng)用價值。 2、鉑類化療藥物處理后肺癌細胞APE1蛋白表達水平明顯升高，表明化療藥物在殺傷癌細胞的同時，癌細胞合成表達APE1增強DNA損傷修復(fù)，這可能是NSCLC癌細胞發(fā)生耐藥的機制之一。 3、阻斷NSCLC細胞APE1基因表達，可顯著提高NSCLC細胞化療敏感性，誘