Smac在非小細(xì)胞肺癌表達(dá)的臨床意義及Smac過(guò)表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞SW1573化療敏感性的研究.pdf

1、肺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，從20世紀(jì)70年代開(kāi)始，其發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)迅速增長(zhǎng)，在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，肺癌死亡率已居惡性腫瘤之首，在我國(guó)發(fā)病率也明顯增高，在沿海等經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)男性肺癌發(fā)病率已居首位，女性也己居第三位，嚴(yán)重影響人類的健康。目前肺癌的治療包括手術(shù)、放療、化療等多種手段，但療效并不令人滿意。總的5年生存率僅為8％-14％，導(dǎo)致生存率較低的原因之一可能在于目前尚未有十分有效的分子標(biāo)志物用于肺癌的早期診斷和治療，因此尋找新的肺

2、癌相關(guān)分子標(biāo)志物和治療分子靶點(diǎn)具有極其重要的意義。 近年來(lái)分子生物學(xué)的研究表明細(xì)胞凋亡與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療密切相關(guān)，并且闡明細(xì)胞內(nèi)主要存在三條選擇性誘導(dǎo)凋亡途徑：死亡受體途徑、線粒體途經(jīng)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑。目前已經(jīng)有很多調(diào)控凋亡的基因或基因產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn)，Smac(Secondmitochondrial-derivedactivatorofcaspase)是2000年發(fā)現(xiàn)的一種促凋亡基因，主要通過(guò)線粒體途徑促進(jìn)細(xì)胞凋亡，成熟的Sm

3、ac以純二聚體的形式存在于線粒體的膜間腔內(nèi)，當(dāng)受到凋亡誘導(dǎo)因子如抗癌藥物、DNA的破壞、紫外線照射以及化學(xué)信號(hào)等的作用時(shí)，Smac蛋白上的信號(hào)肽被切除，形成有活性的Smac，與細(xì)胞色素C一起從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)，通過(guò)解除IAP(Inhibitorofapoptosisprotein)對(duì)Caspase-9及Caspase-3的抑制作用從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡；Smac還可以促進(jìn)Pro-caspase-3的蛋白水解，并且可以增強(qiáng)成熟Caspase-

4、3的活性而發(fā)揮促凋亡作用。 Smac的發(fā)現(xiàn)完善了線粒體是調(diào)控細(xì)胞凋亡中心環(huán)節(jié)的理論，Smac功能的獨(dú)特之處在于它并不誘導(dǎo)健康的細(xì)胞凋亡，但可以將對(duì)凋亡刺激不敏感的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槊舾屑?xì)胞，顯示出在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡中良好的應(yīng)用前景。本研究目的在于從蛋白和RNA水平檢測(cè)Smac在肺癌中的表達(dá)情況，及其表達(dá)與臨床病理因素和預(yù)后的關(guān)系，并探討Smac基因過(guò)表達(dá)在肺癌細(xì)胞株SW1573對(duì)Taxol和DDP化療敏感性的影響。 第1章.Sm

5、ac蛋白在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及其臨床意義 目的：探討Smac蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與臨床病理因素和預(yù)后的關(guān)系。 材料和方法：收集1990年1月至2002年12月中山大學(xué)腫瘤防治中心收治的經(jīng)病理確診且術(shù)后蠟塊保存完好的Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期標(biāo)本234例，采用免疫組化方法檢測(cè)腫瘤組織中Smac的表達(dá)，探討Smac表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系，并進(jìn)行預(yù)后分析。 結(jié)果：Smac陽(yáng)性染色位于細(xì)胞漿，以分界點(diǎn)50％的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)

6、為界分組進(jìn)行分析，低表達(dá)組為26.5％(62/234)，高表達(dá)組為73.5％(172/234)。Smac的表達(dá)與性別、年齡、病理類型無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，按α=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn)，尚不能認(rèn)為這些因素與Smac的表達(dá)有關(guān)；Smac在T1、T2、T3高表達(dá)率分別為77.3％、69.3％、和91.7％，經(jīng)x2檢驗(yàn)，Smac的表達(dá)與T分期有關(guān)(P＜0.05)；Smac高表達(dá)率在N¨N1和N2組的表達(dá)率分別為74.2％、92.4％和38.9

7、％，經(jīng)x2檢驗(yàn)Smac的表達(dá)與N分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Smac在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期的高表達(dá)率分別為70.1％、91.4％和47.4％，經(jīng)x2檢驗(yàn)，Smac蛋白的表達(dá)與TNM分期有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。以分界點(diǎn)50％的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為界分組進(jìn)行分析，采用log-rank檢驗(yàn)作預(yù)后分析，P=0.147，高表達(dá)組與低表達(dá)組的生存率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.Smac在非小細(xì)胞肺癌有較高的表達(dá)，有可能在NSCLC的發(fā)

8、生、發(fā)展過(guò)程中起一定作用。 2.Smac的表達(dá)與T分期、N分期和TNM分期有關(guān)，說(shuō)明Smac與疾病的進(jìn)展有關(guān)，Smac不是非小細(xì)胞肺癌獨(dú)立的預(yù)后因素。 第2章.SmacmRNA在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)及其XIAPnRNA和SurvivinmRNA的關(guān)系 目的：檢測(cè)SmacmRNA、XIAPmRNA和SurvivinmRNA在肺癌腫瘤和正常組織中的表達(dá)，探討其表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性及相互關(guān)系。 材料和方法：

9、收集2004年10月～2005年12月中山大學(xué)腫瘤防治中心收治的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本52例，包括腫瘤和正常組織。采用RT-PCR檢測(cè)SmacmRNA、XIAPmRNA和SurvivinmRNA在腫瘤和正常組織中的表達(dá)。 結(jié)果：SmacmRNA在腫瘤和正常組織中的表達(dá)率分別為59.6％和30.8％，經(jīng)配對(duì)卡方檢驗(yàn)P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。單因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，SmacmRNA的表達(dá)與患者性別、年齡、吸煙、TNM分期、腫瘤

10、標(biāo)志物、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。SmacmRNA在T1、T2和T3的表達(dá)率為100％、56.1％和83.3％，經(jīng)Fisher精確概率檢驗(yàn)，SmacmRNA的表達(dá)與T分期有關(guān)(P=0.04)；XIAPmRNA在腫瘤和正常組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.5％和30.8％，經(jīng)配對(duì)卡方檢驗(yàn)P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，XIAPmRNA的表達(dá)與臨床病理因素?zé)o關(guān)；SurvivinmRNA在腫瘤和正常組織中的表達(dá)率分別為82.7％和23.1％，經(jīng)配對(duì)卡方

11、檢驗(yàn)P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而SurvivinmRNA的表達(dá)與臨床病理因素?zé)o關(guān)。SmacmRNA在腫瘤組織中的表達(dá)與XIAPmRNA呈正相關(guān)。 結(jié)論： 1.SmacmRNA、XIAPmRNA和SurvivinmRNA在腫瘤組織的表達(dá)明顯高于正常組織，說(shuō)明在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中三者都起一定作用。 2.SmacmRNA的在腫瘤組織的表達(dá)與T分期和XIAPmRNA的表達(dá)相關(guān)。 3.XIAPmRNA和Su

12、rvivinmRNA的表達(dá)與肺癌患者臨床病理特征無(wú)相關(guān)性。 第3章.Smac基因過(guò)表達(dá)對(duì)肺癌細(xì)胞SW1573化療敏感性的影響 目的：探討Smac基因在肺癌細(xì)胞株SW1573過(guò)表達(dá)對(duì)DDP和Taxol化療敏感性的影響。材料和方法：采用脂質(zhì)體介導(dǎo)Smac基因轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞株SW1573，Westernblot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后Smac蛋白的變化，選用DDP濃度為1.25μg/ml，Taxol濃度0.004μg/ml作用與轉(zhuǎn)染前后的細(xì)

13、胞，分別在24、48、72和96小時(shí)后用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞的吸光值；流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染Smac前后DDP和Taxol下細(xì)胞凋亡率的變化。 結(jié)果：在SW1573肺癌細(xì)胞株，Smac為低表達(dá)，轉(zhuǎn)染外源性的Smac后SW1573細(xì)胞Smac蛋白的表達(dá)增高；DDP作用24、48、72和96小時(shí)后用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測(cè)定細(xì)胞的吸光值。單獨(dú)轉(zhuǎn)染Smac組吸光值從24h到96h為0.222±0.014～0.22

14、6±0.014，而未轉(zhuǎn)染組吸光值從24h到96h為0.650±0.036～2.110±0.077，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在DDP作用下正常對(duì)照組24、48、72和96小時(shí)的吸光值分別為0.630±0.034、0.934±0.051、1.120±0.051和1.142±0.084，而在轉(zhuǎn)染Smac后變?yōu)?.233±0.005、0.241±0.004、0.246±0.013和0.187±0.017，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在T

15、axol作用下正常對(duì)照組24、48、72和96小時(shí)的吸光值分別為0.594±0.043、0.878±0.037、1.095±0.101和1.232±0.086，在轉(zhuǎn)染Smac后為0.227±0.015、0.260±0.020、0.303±0.026和0.248±0.018，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡率表明：?jiǎn)为?dú)轉(zhuǎn)染Smac的SW1573細(xì)胞的凋亡率由轉(zhuǎn)染前的5.7±1.41％升高到轉(zhuǎn)染后的39.2±1.43％，

16、兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在DDP作用下細(xì)胞的凋亡率由轉(zhuǎn)染前的19.7±1.63％升高到轉(zhuǎn)染后的47.1±1.98％，在Taxol作用下細(xì)胞的凋亡率由轉(zhuǎn)染前的9.8±1.32％升高到56.7±1.54％，兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.在SW1573肺癌細(xì)胞株，轉(zhuǎn)染Smac基因后可以引起Smac蛋白的高表達(dá)。 2.單獨(dú)轉(zhuǎn)染Smac基因?qū)W1573有促凋亡功能，轉(zhuǎn)染Smac基因能明顯提高SW1573對(duì)DDP和Ta