Smac在非小細胞肺癌表達的臨床意義及Smac過表達對肺癌細胞SW1573化療敏感性的研究.pdf

1、肺癌是常見的惡性腫瘤之一，從20世紀70年代開始，其發(fā)病率和死亡率在世界范圍內迅速增長，在歐美等發(fā)達國家，肺癌死亡率已居惡性腫瘤之首，在我國發(fā)病率也明顯增高，在沿海等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)男性肺癌發(fā)病率已居首位，女性也己居第三位，嚴重影響人類的健康。目前肺癌的治療包括手術、放療、化療等多種手段，但療效并不令人滿意?？偟?年生存率僅為8％-14％，導致生存率較低的原因之一可能在于目前尚未有十分有效的分子標志物用于肺癌的早期診斷和治療，因此尋找新的肺

2、癌相關分子標志物和治療分子靶點具有極其重要的意義。 近年來分子生物學的研究表明細胞凋亡與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及治療密切相關，并且闡明細胞內主要存在三條選擇性誘導凋亡途徑：死亡受體途徑、線粒體途經(jīng)和內質網(wǎng)途徑。目前已經(jīng)有很多調控凋亡的基因或基因產物被發(fā)現(xiàn)，Smac(Secondmitochondrial-derivedactivatorofcaspase)是2000年發(fā)現(xiàn)的一種促凋亡基因，主要通過線粒體途徑促進細胞凋亡，成熟的Sm

3、ac以純二聚體的形式存在于線粒體的膜間腔內，當受到凋亡誘導因子如抗癌藥物、DNA的破壞、紫外線照射以及化學信號等的作用時，Smac蛋白上的信號肽被切除，形成有活性的Smac，與細胞色素C一起從線粒體釋放到細胞質，通過解除IAP(Inhibitorofapoptosisprotein)對Caspase-9及Caspase-3的抑制作用從而促進細胞凋亡；Smac還可以促進Pro-caspase-3的蛋白水解，并且可以增強成熟Caspase-

4、3的活性而發(fā)揮促凋亡作用。 Smac的發(fā)現(xiàn)完善了線粒體是調控細胞凋亡中心環(huán)節(jié)的理論，Smac功能的獨特之處在于它并不誘導健康的細胞凋亡，但可以將對凋亡刺激不敏感的細胞轉變?yōu)槊舾屑毎@示出在誘導腫瘤細胞凋亡中良好的應用前景。本研究目的在于從蛋白和RNA水平檢測Smac在肺癌中的表達情況，及其表達與臨床病理因素和預后的關系，并探討Smac基因過表達在肺癌細胞株SW1573對Taxol和DDP化療敏感性的影響。 第1章.Sm

5、ac蛋白在非小細胞肺癌的表達及其臨床意義 目的：探討Smac蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其與臨床病理因素和預后的關系。 材料和方法：收集1990年1月至2002年12月中山大學腫瘤防治中心收治的經(jīng)病理確診且術后蠟塊保存完好的Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期標本234例，采用免疫組化方法檢測腫瘤組織中Smac的表達，探討Smac表達與臨床病理因素的關系，并進行預后分析。 結果：Smac陽性染色位于細胞漿，以分界點50％的陽性細胞數(shù)

6、為界分組進行分析，低表達組為26.5％(62/234)，高表達組為73.5％(172/234)。Smac的表達與性別、年齡、病理類型無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，按α=0.05檢驗水準，尚不能認為這些因素與Smac的表達有關；Smac在T1、T2、T3高表達率分別為77.3％、69.3％、和91.7％，經(jīng)x2檢驗，Smac的表達與T分期有關(P＜0.05)；Smac高表達率在N¨N1和N2組的表達率分別為74.2％、92.4％和38.9

7、％，經(jīng)x2檢驗Smac的表達與N分期有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；Smac在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期的高表達率分別為70.1％、91.4％和47.4％，經(jīng)x2檢驗，Smac蛋白的表達與TNM分期有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。以分界點50％的陽性細胞數(shù)為界分組進行分析，采用log-rank檢驗作預后分析，P=0.147，高表達組與低表達組的生存率無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.Smac在非小細胞肺癌有較高的表達，有可能在NSCLC的發(fā)

8、生、發(fā)展過程中起一定作用。 2.Smac的表達與T分期、N分期和TNM分期有關，說明Smac與疾病的進展有關，Smac不是非小細胞肺癌獨立的預后因素。 第2章.SmacmRNA在非小細胞肺癌的表達及其XIAPnRNA和SurvivinmRNA的關系 目的：檢測SmacmRNA、XIAPmRNA和SurvivinmRNA在肺癌腫瘤和正常組織中的表達，探討其表達與臨床病理因素的相關性及相互關系。 材料和方法：

9、收集2004年10月～2005年12月中山大學腫瘤防治中心收治的非小細胞肺癌標本52例，包括腫瘤和正常組織。采用RT-PCR檢測SmacmRNA、XIAPmRNA和SurvivinmRNA在腫瘤和正常組織中的表達。 結果：SmacmRNA在腫瘤和正常組織中的表達率分別為59.6％和30.8％，經(jīng)配對卡方檢驗P＜0.05有統(tǒng)計學意義。單因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，SmacmRNA的表達與患者性別、年齡、吸煙、TNM分期、腫瘤

10、標志物、病理類型、淋巴結轉移無關。SmacmRNA在T1、T2和T3的表達率為100％、56.1％和83.3％，經(jīng)Fisher精確概率檢驗，SmacmRNA的表達與T分期有關(P=0.04)；XIAPmRNA在腫瘤和正常組織中的陽性表達率分別為61.5％和30.8％，經(jīng)配對卡方檢驗P＜0.05有統(tǒng)計學意義，XIAPmRNA的表達與臨床病理因素無關；SurvivinmRNA在腫瘤和正常組織中的表達率分別為82.7％和23.1％，經(jīng)配對卡方

11、檢驗P＜0.05有統(tǒng)計學意義，而SurvivinmRNA的表達與臨床病理因素無關。SmacmRNA在腫瘤組織中的表達與XIAPmRNA呈正相關。 結論： 1.SmacmRNA、XIAPmRNA和SurvivinmRNA在腫瘤組織的表達明顯高于正常組織，說明在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程中三者都起一定作用。 2.SmacmRNA的在腫瘤組織的表達與T分期和XIAPmRNA的表達相關。 3.XIAPmRNA和Su

12、rvivinmRNA的表達與肺癌患者臨床病理特征無相關性。 第3章.Smac基因過表達對肺癌細胞SW1573化療敏感性的影響 目的：探討Smac基因在肺癌細胞株SW1573過表達對DDP和Taxol化療敏感性的影響。材料和方法：采用脂質體介導Smac基因轉染肺癌細胞株SW1573，Westernblot檢測轉染前后Smac蛋白的變化，選用DDP濃度為1.25μg/ml，Taxol濃度0.004μg/ml作用與轉染前后的細

13、胞，分別在24、48、72和96小時后用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法測定細胞的吸光值；流式細胞儀檢測轉染Smac前后DDP和Taxol下細胞凋亡率的變化。 結果：在SW1573肺癌細胞株，Smac為低表達，轉染外源性的Smac后SW1573細胞Smac蛋白的表達增高；DDP作用24、48、72和96小時后用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法測定細胞的吸光值。單獨轉染Smac組吸光值從24h到96h為0.222±0.014～0.22

14、6±0.014，而未轉染組吸光值從24h到96h為0.650±0.036～2.110±0.077，各個時間點比較均有統(tǒng)計學意義；在DDP作用下正常對照組24、48、72和96小時的吸光值分別為0.630±0.034、0.934±0.051、1.120±0.051和1.142±0.084，而在轉染Smac后變?yōu)?.233±0.005、0.241±0.004、0.246±0.013和0.187±0.017，各個時間點比較均有統(tǒng)計學意義；在T

15、axol作用下正常對照組24、48、72和96小時的吸光值分別為0.594±0.043、0.878±0.037、1.095±0.101和1.232±0.086，在轉染Smac后為0.227±0.015、0.260±0.020、0.303±0.026和0.248±0.018，各個時間點比較均有統(tǒng)計學意義；流式細胞儀測定細胞凋亡率表明：單獨轉染Smac的SW1573細胞的凋亡率由轉染前的5.7±1.41％升高到轉染后的39.2±1.43％，

16、兩組比較有統(tǒng)計學意義；在DDP作用下細胞的凋亡率由轉染前的19.7±1.63％升高到轉染后的47.1±1.98％，在Taxol作用下細胞的凋亡率由轉染前的9.8±1.32％升高到56.7±1.54％，兩組比較有統(tǒng)計學意義。 結論： 1.在SW1573肺癌細胞株，轉染Smac基因后可以引起Smac蛋白的高表達。 2.單獨轉染Smac基因對SW1573有促凋亡功能，轉染Smac基因能明顯提高SW1573對DDP和Ta