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文檔簡(jiǎn)介
1、【目的】
研究重組人甲狀旁腺激素1-34 (recombinant human parathyroidhormone1-34,rhPTH1-34)在體外對(duì)乳鼠顱蓋骨成骨細(xì)胞增殖及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7 (bone morphogenetic protein-7,BMP-7)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9 (bonemorphogenetic protein-9,BMP-9)基因表達(dá)的影響,探討rhPTH1-34作用于成骨細(xì)胞的機(jī)制,為臨
2、床用藥提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。
【方法】
1.培養(yǎng)乳鼠成骨細(xì)胞,并觀察其形態(tài)及功能。
2.以乳鼠成骨細(xì)胞為體外試驗(yàn)?zāi)P?,采用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)24小時(shí)后,通過(guò)不同濃度的重組人甲狀旁腺激素(rhPTH1-34)(0、10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/l)作用于成骨細(xì)胞,觀察增殖能力并測(cè)定OD值。
3.不同濃度的重組人甲狀旁腺激素(rhPTH1-34)(0、
3、10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/l)作用于乳鼠成骨細(xì)胞,通過(guò)RT-PCR 法檢測(cè)成骨細(xì)胞BMP-7、BMP-9基因的表達(dá)。
4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析,數(shù)據(jù)以x±s表示。各組總體上有無(wú)差別采用單因素方差分析,組間兩兩比較用LSD-T檢驗(yàn)。P<0.01有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
【結(jié)果】
1.體外培養(yǎng)的乳鼠成骨細(xì)胞大多呈長(zhǎng)梭形,堿性磷酸酶染色
4、呈陽(yáng)性反應(yīng),胞漿呈灰黑色,茜素紅染色呈紅色陽(yáng)性鈣化結(jié)節(jié)。
2.間歇性小劑量重組人甲狀旁腺激素(rhPTH1-34)(0、10-11、10-10、10-9、10-8、10-7mol/l)作用于成骨細(xì)胞24小時(shí)后,可明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖能力,OD值顯著增加(P<0.01),對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組組間比較,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異均有顯著性(P<0.01)。
3.采用半定量RT-PCR 方法測(cè)定BMP-7、BMP-9基因的表達(dá)
5、。結(jié)果顯示,間歇小劑量給予重組人甲狀旁腺激素(rhPTH1-34)可促進(jìn)成骨細(xì)胞BMP-7、BMP-9基因表達(dá)的能力,且濃度為10-9 mol/l時(shí),成骨細(xì)胞BMP-7、BMP-9基因表達(dá)明顯升高,且光密度比值顯著增高。對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組組間比較,均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
【結(jié)論】
1.間歇性小劑量重組人甲狀旁腺激素(rhPTH1-34)可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖。
2.間歇性小劑量重
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