應(yīng)用功能分類基因芯片篩選小鼠組織細(xì)胞肉瘤L-Ⅱ轉(zhuǎn)移相關(guān)基因.pdf

1、目的：采用基因芯片技術(shù)比較篩選前的小鼠組織細(xì)胞肉瘤L—Ⅱ與篩選后的具有高轉(zhuǎn)移能力的第9代轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞之間的基因表達(dá)譜，利用生物信息學(xué)方法篩選出與淋巴瘤侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的差異基因。 方法：L—Ⅱ瘤細(xì)胞接種小鼠脅部皮下，取其肺轉(zhuǎn)移灶制成細(xì)胞懸液接種另一小鼠體內(nèi)，再取其肺轉(zhuǎn)移灶繼續(xù)傳代。對(duì)篩選前的L—Ⅱ瘤株和篩選后的第9代瘤株的細(xì)胞形態(tài)、生存時(shí)間、腫瘤生長(zhǎng)曲線、免疫組化的差異進(jìn)行了比較。再分別提取篩選前后瘤細(xì)胞的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄將細(xì)胞

2、cDNA進(jìn)行生物素標(biāo)記，用美國(guó)Superarray公司的含113個(gè)目的基因的腫瘤轉(zhuǎn)移基因芯片雜交，GEArray軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，篩選出傳代前后表達(dá)有差異的基因。對(duì)部分有差異表達(dá)的基因用RT—PCR和Westernblot進(jìn)行分析鑒定。 結(jié)果：用體內(nèi)轉(zhuǎn)移灶連續(xù)傳代法篩選小鼠組織細(xì)胞肉瘤L—Ⅱ至第9代。形態(tài)學(xué)觀察：光鏡下篩選前后瘤細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)基本一致，細(xì)胞呈彌漫分布，細(xì)胞圓形至多邊形，大小不等，核圓形、梭形或不規(guī)則形，嗜堿性增強(qiáng)

3、，核漿比例增大，核分裂像較多，可見病理性核分裂像。生物學(xué)特性觀察：小鼠荷瘤生存時(shí)間顯示篩選前的L—Ⅱ瘤株為29.23±2.90天，篩選后的第9代瘤株為23.66±2.97天，P＜0.05，兩者差別有顯著性。腫瘤生長(zhǎng)曲線：結(jié)果顯示篩選后的第9代瘤株生長(zhǎng)速度快于篩選前的瘤株。免疫組化：篩選后的第9代瘤株IGF—1、MMP—10表達(dá)均較篩選前的L—Ⅱ瘤株增強(qiáng)。用腫瘤轉(zhuǎn)移基因芯片雜交篩選出傳代前后L—Ⅱ瘤細(xì)胞的差異表達(dá)基因共21個(gè)，涉及腫瘤轉(zhuǎn)移

4、發(fā)生發(fā)展的各個(gè)方面，其中上調(diào)基因17個(gè)，下調(diào)基因4個(gè)。其中：細(xì)胞黏附相關(guān)基因2個(gè)、基質(zhì)金屬蛋白酶2個(gè)、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期基因3個(gè)、細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖基因5個(gè)、凋亡相關(guān)基因1個(gè)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因2個(gè)、其他6個(gè)。選擇其中有代表意義的4個(gè)基因利用RT—PCR和Westernblot進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果證實(shí)所選基因在篩選前后瘤細(xì)胞中均有差異表達(dá)，與基因芯片的表達(dá)情況一致，說明基因芯片結(jié)果可信度較高。 結(jié)論： 1成功篩選出L—Ⅱ高侵襲轉(zhuǎn)移瘤株，篩選后