膜型基質(zhì)金屬蛋白酶在人惡性造血細(xì)胞株和內(nèi)皮細(xì)胞株中的表達(dá)及意義.pdf

1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文膜型基質(zhì)金屬蛋白酶在人惡性造血細(xì)胞株和內(nèi)皮細(xì)胞株中的表達(dá)及意義姓名：蔣菊香申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科血液學(xué)指導(dǎo)教師：阮長耿20070401膜型基質(zhì)金屬蛋白酶在人惡性造血細(xì)胞株和內(nèi)皮細(xì)胞株中的表達(dá)及意義中文摘要pcDNA31／V5HisTOPOMTlMMP表達(dá)載體；載體經(jīng)酶切、PCR和測序鑒定后通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至HL60瞬時(shí)表達(dá)，RTPCR，realtimePCR和流式細(xì)胞術(shù)鑒定轉(zhuǎn)染效果。利用建立的HL60／MTl

2、MMP細(xì)胞為模型，HL60／pcDNA31為對照，用MTT法檢測細(xì)胞的增殖，realtimePCR檢測MMP2、Bcl2和Bax的表達(dá)，Transwell板檢測細(xì)胞侵襲能力，流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期。結(jié)果：成功構(gòu)建了MTlMMP表達(dá)載體，real—timePCR和流式細(xì)胞術(shù)鑒定MTlMMP能在HL60中獲得高效表達(dá)。MTT法結(jié)果提示轉(zhuǎn)染后HL60／MTlMMP細(xì)胞的增殖能力顯著高于對照組(P001)，real—timePCR提示轉(zhuǎn)染后48

3、h轉(zhuǎn)染組和對照組相比MMP一2、Bcl2和Bax的表達(dá)無明顯變化，Transwell板檢測結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后48hHL60／MTlMMP的侵襲能JJ(15424238％)顯著高于對照組(5164O78呦(Po01)，細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后24h，HL60／MTlMMPG2期和S期比例(6754357％)高于對照組(5794252％)(P005)，而轉(zhuǎn)染后48h和72h則兩組細(xì)胞細(xì)胞周期無明顯差別。結(jié)論：過度表達(dá)MTlMMP的白血病細(xì)胞株體外

4、增殖和侵襲能力增強(qiáng)，而其侵襲能力的增強(qiáng)與MlVlP一2無直接關(guān)系，MTlMMP可能不直接參與調(diào)節(jié)Bcl2／Bax介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。三、siRNA靶向干擾多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞株RPMl8226中MT2MMP的表達(dá)及對其功能影響的初步研究目的：通過RNA干擾降低RPMl8226中MT2一MMP的表達(dá)，探討MT2一MMP對RPMl8226細(xì)胞增殖，凋亡，細(xì)胞周期和表達(dá)血管內(nèi)皮生長因子及其受體基因的影響。方法：RealtimePCR篩選3對siRNA

5、(siRNAA，siRNAB，siRNAC)24h，48h和72h的干擾效率，流式細(xì)胞術(shù)鑒定M他MMP蛋白水平的干擾。以有效干擾的siRNA通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染RPMl8226，建立MT2MMP瞬時(shí)沉默細(xì)胞模型，以無關(guān)siRNA轉(zhuǎn)染RPMl8226組作為對照，MTT法檢測細(xì)胞的增殖，realtimePCR檢測Bcl2，Bax及VEGFA，B，C，D，PIGF，VEGFRl和VEGFR2基因的表達(dá)，Transwell板檢測細(xì)胞侵襲能力，流式細(xì)胞