腫瘤細胞誘導巨噬細胞產(chǎn)生促瘤功能.pdf

1、目的：研究與腫瘤細胞相互作用的巨噬細胞腫瘤微環(huán)境中的免疫細胞（巨噬細胞）的功能轉(zhuǎn)變，與腫瘤細胞共培養(yǎng)后，巨噬細胞由對腫瘤的殺傷作用轉(zhuǎn)變?yōu)閷δ[瘤細胞增殖的促進作用。并且進一步研究使巨噬細胞產(chǎn)生此種變化的誘因以及相關的分子機制。
　　 方法：⑴將腫瘤細胞與巨噬細胞共培養(yǎng)一段時間（72小時），此為巨噬細胞與腫瘤細胞初次共培養(yǎng)，將此與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞與腫瘤細胞再次共培養(yǎng)，對照組為腫瘤細胞單獨培養(yǎng)組以及新鮮分離的巨噬細胞與腫瘤細

2、胞共培養(yǎng)組，運用細胞計數(shù)學方法和流式細胞術方法檢測經(jīng)過與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞（以下稱為“與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞”）對腫瘤細胞增殖的影響。⑵巨噬細胞與腫瘤細胞兩室共培養(yǎng),觀察在巨噬細胞和腫瘤細胞不接觸時與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞是否具有促進腫瘤細胞增殖的能力。⑶用這種與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞和腫瘤細胞混合后，接種入小鼠腿部肌肉，對照組為腫瘤細胞單獨接種小鼠肌腿部肉以及新鮮分離巨噬細胞與腫瘤細胞混合接種小鼠腿部肌肉，觀察實

3、驗組與對照組之間在腫瘤形成中作用的不同。⑷將這種與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞接種到腫瘤小鼠腫瘤內(nèi)部，對照組為腫瘤內(nèi)部接種新鮮分離的巨噬細胞，觀察實驗組與對照組腫瘤生長的差別。⑸采用細胞培養(yǎng)方法，在培養(yǎng)過程中加入腫瘤細胞凍融上清，模擬腫瘤微環(huán)境，流式細胞術檢測經(jīng)腫瘤凍融上清刺激的巨噬細胞對腫瘤細胞增殖的影響以及巨噬細胞表面標志的變化。⑹在巨噬細胞生長的不同階段加入腫瘤細胞凍融上清處理，RT-PCR檢測處理后巨噬細胞基因表達的變化。

4、　　 結果：①結果顯示，體外培養(yǎng)時，與空白培養(yǎng)的腫瘤細胞和新鮮分離巨噬細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)組相比，與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞可明顯促進H22腫瘤細胞的增長。并且這種情況在將巨噬細胞與腫瘤細胞兩室培養(yǎng)時同樣成立。②體內(nèi)試驗中，與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞和腫瘤細胞混合后接種小鼠，小鼠腫瘤生長速度比單純接種腫瘤細胞以及新鮮分離巨噬細胞與腫瘤細胞混合接種組小鼠快。③在同樣大小的瘤中，瘤內(nèi)接種與腫瘤細胞共培養(yǎng)后的巨噬細胞亦可以促進腫瘤的生長

5、。④流式細胞術的結果顯示，加入腫瘤細胞凍融上清培養(yǎng)的巨噬細胞具有促進腫瘤細胞的增殖能力。⑤腹腔分離巨噬細胞在體外培養(yǎng)時其表面標志Gr1，CD11b，F(xiàn)4/80的表達發(fā)生變化。⑥加入腫瘤細胞凍融上清培養(yǎng)后的巨噬細胞VEGF和PDGF表達量增高。
　　 結論：免疫細胞如巨噬細胞在體內(nèi)微環(huán)境中與腫瘤細胞相互作用后，其功能發(fā)生改變，變成一種腫瘤生長的促進因子，幫助腫瘤細胞在機體中免疫逃逸。這種變化時由于腫瘤細胞與巨噬細胞相互作用的過程腫