巨噬細(xì)胞微粒通過激活MAPK信號通路誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-8.pdf

1、目的：巨噬細(xì)胞微粒是介導(dǎo)慢阻肺、糖尿病、慢性腎病等病發(fā)病的重要病因。目前研究已得知，巨噬細(xì)胞微粒引起的過度炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的免疫損傷是其致病的主要原因，但是巨噬細(xì)胞微粒引起過度炎癥反應(yīng)的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)研究旨在探討巨噬細(xì)胞微粒能否誘導(dǎo)人單核細(xì)胞(THP-1)產(chǎn)生炎癥因子IL-8，以及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路在巨噬細(xì)胞微粒誘導(dǎo) THP-1細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子IL-8的過程中的作用，進(jìn)一步探討巨噬細(xì)胞微粒的致病原理。

2、>　　方法：參照Nakamura和Yang SR的方法，用注射器連續(xù)抽吸收集2支完全燃燒的香煙的煙霧，隨后將煙霧慢慢注射到不含血清的20ml培養(yǎng)基中，得到濃度為10％的香煙煙霧提取物（cigarette smoke extract，CSE）溶液。THP-1細(xì)胞用含佛波酯（PMA）的培養(yǎng)基處理24h后再用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基刺激20h，隨后收集微粒并作流式細(xì)胞術(shù)檢測。分別用103、104、105、106/ml的巨噬細(xì)胞微粒處理已被用

3、含佛波酯（PMA）的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細(xì)胞，分別在0h、3h、6h、12h、24h停止刺激。收集細(xì)胞后ELISA方法檢測 IL-8。105/ml的巨噬細(xì)胞微粒處理已被用含PMA的培養(yǎng)基刺激24h的THP-1細(xì)胞，分別在0min，15min，30min，60min停止刺激。Western blotting方法分別檢測ERK1/2、JNK、p38的磷酸化程度。分別用1 μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB20

4、3580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑 PD98059預(yù)處理已被PMA刺激的THP-1細(xì)胞，30min后再用105/ml巨噬細(xì)胞微粒刺激THP-1細(xì)胞12h，并用ELISA方法分析不同抑制劑對 IL-8產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)用含2.5%的CSE的培養(yǎng)基培養(yǎng)經(jīng) PMA處理的THP-1細(xì)胞20h后，能明顯誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生巨噬細(xì)胞微粒。
　　(2) ELISA結(jié)果表明，不同

5、濃度組的巨噬細(xì)胞微粒都能明顯刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-8。細(xì)胞上清中IL-8含量隨微粒處理濃度的增加表現(xiàn)為逐漸升高的趨勢，當(dāng)微粒濃度為105/ml時(shí)達(dá)到最高。在同一濃度組間，隨著處理時(shí)間的遞增，IL-8的含量逐漸升高，在12h時(shí)IL-8產(chǎn)生最多，隨后下降。
　　(3) WB圖片表明，巨噬細(xì)胞微粒處理THP-1細(xì)胞后p38/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平都較對照組升高，并且隨著巨噬細(xì)胞微粒處理時(shí)間的遞增p38

6、/MAPK、JNK和ERK1/2/MAPK的磷酸化水平逐漸升高，三條通路的磷酸化程度基本都在處理THP-1細(xì)胞30min后升為最高。
　　(4) ELISA檢測結(jié)果表明：分別用1μM、10μM、30μM的p38特異性抑制劑SB203580、JNK特異性抑制劑SP600125、ERK1/2特異性抑制劑 PD98059預(yù)處理 THP-1細(xì)胞后，巨噬細(xì)胞微粒刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的IL-8含量都較未使用時(shí)降低，并且與抑制劑的濃度呈劑量依

7、賴性。當(dāng)三種特異性抑制劑濃度為30μM時(shí)，IL-8含量分別降到31.3%、46.1%和51.4%。
　　結(jié)論：
　　(1)香煙煙霧可誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生巨噬細(xì)胞微粒；
　　(2)巨噬細(xì)胞微?？烧T導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥因子IL-8；
　　(3)巨噬細(xì)胞微?？杉せ頔RK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路，活化的ERK1/2/MAPK、JNK/MAPK和p38/MAPK通路可能與巨噬細(xì)胞微粒