乳腺癌及癌前病變中RASSF1A基因甲基化及RASSF1A、B-RAF蛋白表達(dá)研究.pdf

1、背景和目的：乳腺癌是威脅女性健康的常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率有逐年增高的趨勢。目前，臨床上對于乳腺癌的治療仍是以傳統(tǒng)的手術(shù)切除為主要手段，術(shù)后的放療、化療及內(nèi)分泌治療只為其輔助手段，雖然此種治療策略使患者的生存率得以顯著改善，但患者遠(yuǎn)期的生活質(zhì)量卻很受影響。因此，發(fā)現(xiàn)一種早期的分子標(biāo)記物，并配以適當(dāng)合理的治療方法，將乳腺癌的危害性降到最低，則顯得尤為迫切。本研究擬對乳腺癌及癌前病變中RASSFlA基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島超甲基化情況及其與B

2、-RAF蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測，分析它們與乳腺癌早期診斷及治療的關(guān)系及臨床意義。 方法：收集山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院病理科2005年～2007年乳腺癌及癌前病變的術(shù)后凍存標(biāo)本，其中良性增生標(biāo)本20例(單純性增生組織4例，纖維腺瘤組織16例)，不典型增生組織10例，原位癌組織10例，原發(fā)性浸潤性乳腺癌組織標(biāo)本60例及相應(yīng)癌旁組織20例，均經(jīng)常規(guī)HE染色確定診斷；采用甲基化特異性PCR(MSP)檢測上述組織中RASSFlA基因啟動(dòng)子區(qū)超甲

3、基化狀態(tài)；應(yīng)用Western-blot方法檢測上述組織中RASSFlA和B-RAF蛋白表達(dá)情況。并用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.RASSFlA基因在良性乳腺增生組織與癌旁對照組織中甲基化頻率為0；不典型增生組織甲基化頻率為20.0％，隨著異常增生程度的加劇，呈現(xiàn)逐步加強(qiáng)趨勢，但輕、中、重度間變化趨勢不明顯；乳腺原位癌組織甲基化頻率為為40.0％，與不典型增生組織相比，差異不明顯。 2.浸潤

4、性乳腺癌組織中，RASSFlA基因甲基化頻率61.7％，較癌旁組織、良性增生組織及不典型增生組織明顯升高。隨著乳腺癌惡性程度的升高，RASSFlA啟動(dòng)子甲基化水平隨之加強(qiáng)，Ⅲ級(jí)與I級(jí)+Ⅱ級(jí)乳腺癌相比差異有顯著性。 3.浸潤性乳腺癌組織中，RASSFlA基因甲基化水平與乳腺癌的病理分級(jí)及臨床分期相關(guān)，而與腫瘤組織的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無關(guān)。 4.RASSFlA蛋白表達(dá)在癌旁組織、良性乳腺增生組織、不典型增生及原位癌組織中表達(dá)率為

5、100％、100％、80.0％、80.0％；乳腺癌組織中，表達(dá)缺失率為36.7％，在腫瘤分級(jí)及臨床分期間差異具有顯著性。 5.乳腺癌組織中RASSFlA基因甲基化與其蛋白表達(dá)缺失，兩者間具有相關(guān)性。 6.B-RAF蛋白僅在乳腺癌Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)組織中有所表達(dá)，陽性率為18.3％，腫瘤分級(jí)間差異具有顯著性。B-RAF蛋白與RASSFlA基因甲基化及其蛋白表達(dá)間均無相關(guān)性。 結(jié)論： 1.MSP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抑癌基因

6、RASSFlA在乳腺癌前病變到浸潤性癌的發(fā)生發(fā)展過程中的基因啟動(dòng)子甲基化發(fā)生水平呈進(jìn)行性上調(diào)，提示RASSFlA基因啟動(dòng)子高甲基化可能參與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。有望成為監(jiān)測乳腺組織病理變化的有效分子標(biāo)記物。 2.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抑癌基因RASSFlA在乳腺癌前病變到乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中蛋白表達(dá)水平呈進(jìn)行性下調(diào)，說明乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與RASSFlA基因的表達(dá)沉默可能有關(guān)。 3.RASSFlA基因超甲