冠突散囊菌產(chǎn)色素類(lèi)物質(zhì)的初步研究.pdf

1、茯磚茶的茶湯呈現(xiàn)透亮的橙紅色，具有降血脂血糖、減肥助消化及抗氧化等保健功效。冠突散囊菌是茯磚茶發(fā)花過(guò)程中形成的優(yōu)勢(shì)菌株，其代謝產(chǎn)物種類(lèi)繁多，有色素類(lèi)、胞外多糖類(lèi)、酶類(lèi)、氨基酸類(lèi)等，前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，色素類(lèi)物質(zhì)具有一定的生理活性，因此具有很高的研究?jī)r(jià)值。
　　本研究以陜西茯磚茶中提取的冠突散囊菌為菌種，采用麩皮對(duì)其進(jìn)行固體培養(yǎng)，通過(guò)超聲輔助提取等方法對(duì)冠突散囊菌色素進(jìn)行提取并對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，通過(guò)TLC、HPLC等方法對(duì)提取出的色

2、素進(jìn)行分離純化，利用紫外、紅外光譜等方法對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行初步探究，從而推測(cè)出可能的色素類(lèi)型，為藥品和保健食品的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。本研究的內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.在冠突散囊菌固體培養(yǎng)工藝條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上，考察了菌體生長(zhǎng)期間代謝產(chǎn)物中黃色素產(chǎn)量的變化情況，結(jié)果表明:黃色素代謝產(chǎn)物的變化趨勢(shì)為先升高，后降低，固體培養(yǎng)至第五天時(shí)，冠突散囊菌代謝的黃色素產(chǎn)量最大。
　　2.以石油醚為最佳提取溶劑，優(yōu)化了超聲輔助提取法和有機(jī)溶劑浸提法的工藝條

3、件，結(jié)果如下，超聲輔助提取法的最佳提取工藝為:料液比1∶20，溫度50℃，時(shí)間20min。最高得率可達(dá)1.34％左右。有機(jī)溶劑浸提法的最佳提取工藝為:料液比1∶30，溫度60℃，時(shí)間1h。最高得率可達(dá)0.83％左右。結(jié)果表明:超聲輔助提取法所用時(shí)間短，提取效率高，減少了一些非目標(biāo)物質(zhì)的溶出，極大降低了雜質(zhì)的干擾，提取效果明顯優(yōu)于有機(jī)溶劑浸提法。
　　3.利用薄層色譜、高效液相色譜等方法對(duì)冠突散囊菌色素提取液進(jìn)行分離純化。
　

4、　(1)選擇了16種不同極性的展開(kāi)劑對(duì)冠突散囊菌色素提取濃縮液中的成分進(jìn)行初步分離，結(jié)果表明:展開(kāi)劑石油醚∶乙酸乙酯=1∶1(v/v)能分離出兩個(gè)主要斑點(diǎn)，分別是Rf值為0.882的黃色斑點(diǎn)和Rf值為0.776的紅色斑點(diǎn)。分離效果的重現(xiàn)性良好，且兩個(gè)斑點(diǎn)的Rf值相差比較大，有利于黃色斑點(diǎn)的收集，將收集到的黃色斑點(diǎn)記為黃色素。
　　(2)將上述黃色斑點(diǎn)即黃色素收集后，利用展開(kāi)劑石油醚∶丙酮=9∶1(v/v)對(duì)其進(jìn)行二次分離，結(jié)果表明

5、:展開(kāi)劑石油醚∶丙酮=9∶1(v/v)能將黃色素再次分開(kāi)為三個(gè)主要斑點(diǎn)，其Rf值分別為0.513、0.462、0.423，分離效果的重現(xiàn)性良好，且三個(gè)斑點(diǎn)的Rf值相差比較大，有利于三種組分的分開(kāi)收集，收集到的三種組分分別記為:黃色素組分Ⅰ、黃色素組分Ⅱ、黃色素組分Ⅲ。
　　(3)采用高效液相色譜法對(duì)黃色素組分Ⅰ、黃色素組分Ⅱ、黃色素組分Ⅲ進(jìn)行進(jìn)一步的分離，結(jié)果表明:黃色素組分Ⅰ在流動(dòng)相甲醇∶水=90∶10(v/v)的洗脫下，分離圖

6、譜上出現(xiàn)了1個(gè)主要物質(zhì)峰，其保留時(shí)間為15.651min;黃色素組分Ⅱ在流動(dòng)相甲醇∶水=95∶5(v/v)的洗脫下，分離圖譜上出現(xiàn)了2個(gè)主要物質(zhì)峰，其保留時(shí)間分別為6.69min、16.296min;黃色素組分Ⅲ在流動(dòng)相甲醇∶水=95∶5(v/v)的洗脫下，分離圖譜上同樣出現(xiàn)了2個(gè)主要物質(zhì)峰，其保留時(shí)間分別為6.605min、15.038min。
　　4.利用薄層色譜、紫外-可見(jiàn)光譜、紅外光譜等方法對(duì)黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素

7、、苯甲酸三種對(duì)照品進(jìn)行對(duì)比性探究，推測(cè)黃色素的結(jié)構(gòu)類(lèi)型。
　　(1)利用薄層色譜法，將黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素對(duì)照品進(jìn)行對(duì)比性驗(yàn)證，展開(kāi)劑為石油醚∶丙酮=3∶1，結(jié)果表明:番茄紅素的Rf值為0.923，β-胡蘿卜素對(duì)照品的R值為0.962，黃色素樣品斑點(diǎn)的Rf值集中在0.610左右，由此可知，三者的Rf值有明顯的差別，因此推測(cè)黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素不是同一類(lèi)物質(zhì)。
　　(2)利用紫外-可見(jiàn)光譜法在300-600

8、nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，對(duì)黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素、苯甲酸三種對(duì)照品進(jìn)行對(duì)比性驗(yàn)證，結(jié)果表明:番茄紅素有三個(gè)特征吸收峰，分別為444nm、470nm、502nm;β-胡蘿卜素有兩個(gè)特征吸收峰，分別為450nm、478nm;苯甲酸有兩個(gè)特征吸收峰，分別為285nm、388nm;黃色素有一個(gè)特征吸收峰為398nm，其中的黃色素組分Ⅰ有一個(gè)特征吸收峰為389nm，黃色素組分Ⅱ有兩個(gè)特征吸收峰，分別為330nm、390nm，黃色素組分Ⅲ有

9、兩個(gè)特征吸收峰，分別為330nm、397nm。其中黃色素組分Ⅰ、Ⅱ分別在389nm、390nm處的吸收峰與苯甲酸在388nm處的吸收峰基本吻合，因此推測(cè)黃色素與苯甲酸含有相同的官能團(tuán)，此處的特征吸收峰可能是由苯樣結(jié)構(gòu)所引起的。
　　(3)利用紅外光譜法對(duì)黃色素與番茄紅素、β-胡蘿卜素、苯甲酸三種對(duì)照品進(jìn)行對(duì)比性驗(yàn)證，結(jié)果表明:番茄紅素含有的官能團(tuán)有C=C、-CH2-、-CH3;β-胡蘿卜素含有的官能團(tuán)有C-H、C=C、-CH3、-