甜瓜乙烯應(yīng)答因子基因CmERFi-5、CmERFI-13、CmERFI-15在果實發(fā)育過程中的功能分析.pdf

1、本文以甜瓜品種河套蜜瓜為材料，研究了甜瓜乙烯應(yīng)答因子(Ethylene response factor, ERF)基因CmERFI-5、CmERFI-13、CmERFI-15在果實中的功能。ERF基因位于乙烯信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的下游，通過結(jié)合GCC-box調(diào)控下游靶基因的表達(dá)，從而起到調(diào)控果實發(fā)育的功能。采用RT-PCR技術(shù)從甜瓜中克隆到了CmERFI-5、CmERFI-13和CmERFI-15基因的cDNA。所克隆的全長cDNA分別為934

2、 bp、879 bp和769 bp，其ORF分別為732 bp、834 bp、636 bp，編碼243、277、211個氨基酸。分別構(gòu)建其超表達(dá)載體和RNAi載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的瞬時表達(dá)技術(shù)將目的基因的超表達(dá)及RNAi載體注射到綠熟期甜瓜果實中，并對注射部位進(jìn)行觀察。CmERFI-5基因的超表達(dá)和RNAi干擾載體使注射部位均出現(xiàn)了保持綠色（延遲成熟）的表型。CmERFI-13基因的超表達(dá)載體注射部位提前變黃，而RNAi干擾質(zhì)粒使注射部

3、位保持綠色。CmERFI-15基因的超表1達(dá)載體注射部位保持綠色，而RNAi載體注射部位提前變黃。分子檢測結(jié)果顯示，注射CmERFI-5、CmERFI-13和CmERFI-15基因的超表達(dá)載體后，注射部位與對照相比目的基因的表達(dá)量上升，表明外源基因得到了表達(dá);注射RNAi載體后，目的基因的表達(dá)量與對照相比下降，表明成功抑制了內(nèi)源基因的表達(dá)。果實成熟相關(guān)基因的qRT-PCR檢測表明，CmERFI-5基因沒有顯示出調(diào)控作用，CmERFI-1