缺氧對(duì)體外培養(yǎng)大鼠O2A Tau蛋白的影響.pdf

1、目的：培養(yǎng)、純化以獲得較高純度的大鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(02A)，觀察各個(gè)時(shí)期細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；在模擬缺氧條件下培養(yǎng)不同的時(shí)間，觀察02A在缺氧條件下的形態(tài)學(xué)變化，采用免疫組化和Western blot等技術(shù)，測(cè)定各個(gè)缺氧時(shí)間段Tau蛋白的強(qiáng)度，探索缺氧對(duì)02A Tau蛋白的影響。 方法：采用兩次恒溫?fù)u床振蕩培養(yǎng)法培養(yǎng)、純化02A，A285免疫熒光染色法進(jìn)行細(xì)胞鑒定，倒置熒光顯微鏡拍照，并觀察計(jì)算細(xì)胞純度。以低糖缺氧環(huán)境模擬體內(nèi)缺

2、氧缺血狀態(tài)，建立大鼠02A體外缺氧模型，觀察02A在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)學(xué)變化，并開(kāi)展Western blot和免疫組化實(shí)驗(yàn)，利用激光共聚焦顯微鏡測(cè)定熒光強(qiáng)度，反映Tau蛋白量的變化。 結(jié)果：純化后02A細(xì)胞胞體呈圓形，有單極或雙極突起，形成克隆球，A285標(biāo)記陽(yáng)性，免疫熒光鑒定細(xì)胞純度可達(dá)85％以上。隨著暴露在低糖缺氧環(huán)境中時(shí)間的延長(zhǎng)，02A細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，突起逐漸縮短，免疫熒光強(qiáng)度和灰度值均逐漸減弱，Tau蛋白量呈減少趨勢(shì)。