gdnf和hsv-gdnf對(duì)體外培養(yǎng)大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元損傷后bcl-2表達(dá)的影響

1、西北 國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志 ( Me dJN D F N C ) 2 0 0 5A u g ． ； 2 6 ( 4 )2 5 9G D N F和 H S V—G D N F對(duì) 體 外 培 養(yǎng) 大 鼠 脊 髓 運(yùn) 動(dòng) 神 經(jīng) 元 損 傷 后 B c l 一2表 達(dá) 的 影 響 王常利 ， 周長(zhǎng)滿 ， 蘇劍斌 ( 1 ． 解放 軍第 3 2 3醫(yī)院病理科 ， 陜 西 西安 7 1 0 0 5 4 ； 2 ， 解放 軍北京軍 醫(yī)學(xué)院解剖教研 室)

2、· 論著 ·摘要 ： 目的 ： 觀察 G D N F和單純皰疹病 毒載體介導(dǎo)的 G D N F( H S V— G D N F ) 對(duì)體外 培養(yǎng) 大鼠脊髓運(yùn) 動(dòng)神經(jīng) 元損 傷后 B ~ I 一 2 表 達(dá)的影響 。方法 ： 將培養(yǎng) 8d 的神經(jīng)元 ， 隨機(jī)分成 4 組 ， 行劃痕損 傷后觀察神 經(jīng)元存活數(shù) 、 B c l 一 2 免疫反 應(yīng) ( B C L 一 2 一 I R ) 陽(yáng)性 神經(jīng)元數(shù) 目和平均 光密度。結(jié)

3、果 ： 損傷后第 l 、 3 、 5 和 7 天 ， G D N F和 H S V— G D N F 組 的三項(xiàng)指標(biāo)均 明顯高于 同期對(duì) 照組 ； 第 1 、3天 ， G D N F功效優(yōu)于 H S V—G D N F； 第 5 、 7天 ， H S V— G D N F的功 效較好 。結(jié) 論 ： G D N F和 H S V—G D N F具 有增 強(qiáng)受損運(yùn) 動(dòng)神經(jīng) 元 B c l 一2表達(dá) 的作用 ， 且 H S V—G D N F

4、作用 時(shí)間較長(zhǎng) 。關(guān)鍵詞 ： 膠 質(zhì)細(xì)胞源性神 經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 ( G D N F ) ； 單純皰 疹病毒 ( HS V) 載體系 統(tǒng) ；B c l 一 2中圖分類(lèi)號(hào) ： R3 2 2 ． 8 1文獻(xiàn)標(biāo) 識(shí)碼 ： A文章編號(hào) ： 1 0 0 7— 8 6 2 2 ( 2 0 0 5 ) 0 4— 0 2 5 9—0 3Efe c t so fGDNFa n dHS V - — GDNFo nBc l- — 2e x p r e s s i

5、o no fs p i n a lc o r dmo t o n e u r o n so fr a t sa f t e rt h e i rs c r a t c hi ~u r yi nv i t r oWA N GC h a n g—l i ，Z H O UC h a n g—ma n ，S UJ i a n —b i n ． ( D e p a r t me n to fP a t h o l o g y ，3 2 3 r d

6、H o s p i t a l ，P L A，7 1 0 0 5 4 ，C h i n a )Ab s t r a c t ： 0 b j e c t i v e ： T os t u d yt h ee f e c t so fG D N Fa n dH S V—G D N Fo nB c l 一 2e x p r e s s i o no fs p i n a lc o r dm o t o n e u —I o n so fr a

7、 t sa f t e rb e i n gi n j u r e dnv i t r o ．Me t l l o t i s ： T h en e u r o n sc u l t u r e di nv i t r ow e r er a nd o m l yd i v i d e di n t of o u rg r o u p so nt he8 t h d a y ．T h en u mb e ro fs u r v i v

8、 a ln e u r o n s ．a(chǎn) n dt h en u mb e ra n dt heme a no p t i c a ld e n s i t i e so fB c l一2i mm u n o r e a c t i v ep o s i t i v en e u r o n sw e r er e s p e c t i v e l yo b s e r v e da f t e rs c r a t c hi n j

9、 u r y ．Re s u l t s： B yd r a w i n gac o mp a r i s o nwi t h c o r r e s p o n d i n gs a mp l e s ， i ts h o we dt ha tt he s ei t e msi nGD NFa n dHS V — GD NFg r o u pwe r es i g n i f i c a n t l yi mp r o v e do

10、 nt hels t ， 3 r d， 5 t h a n d7 t hd a y ．T h ee f e c t so fGDNFw e r eb e t t e rt h a nt ho s eo fHS V —GDNFo nt h els ta nd3 r dd a y ，h o w e v e r ， t h e yw e r ej u s tc o n v e r s eo nt he5 t h a nd7 t hd a

11、y ．C o n c l u s i o n ： G D N Fa n dHS V—G D N Fc a ne n h a n c eB c l 一 2e x p r e s s i o na n dH S V — G D N Fh a sal o n g e re f e c tt h a nG D N Fo ni n j u r e dmo t o n e u r o n s ．Ke yw o r d s ： G l i a lc

12、e l ll i n e—d e r i v e dn e u r o t i op h i cf a c t o r ； H e r p e ss i m p l e sv i r u s( H S V)v e c t o rs y s t e m；B c l 一 2膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子( G D N F ) 對(duì) 多種神 經(jīng)元具有促進(jìn)生長(zhǎng) ， 減少死亡等功能， 是一種多效能 因子 。單純皰 疹病 毒 ( H S V )一I 型 具

13、有 嗜神經(jīng) 細(xì) 胞 、 構(gòu)建簡(jiǎn)單 、 傳遞外源基 因效率高 以及感染后可建 立隱性感染狀態(tài)等特點(diǎn) ， 成為外源基 因一個(gè)很好的 荷載工具 。B c l 一 2為癌基 因 b c l 一 2的表達(dá)產(chǎn)物 ， 神 經(jīng)元 B c l 一 2的過(guò) 度表 達(dá)能夠阻斷或抑制 神經(jīng)元的 凋 亡 ? 。基金項(xiàng) 目： 全軍 醫(yī)學(xué)科 研面上 基金 資助項(xiàng) 目( 9 8 M 1 1 7 )收稿 日期 ： 2 0 0 5— 0 3—1 9作者 簡(jiǎn) 介 ： 王 常

14、 利 ( 1 9 7 5 一 ) ， 女 ，醫(yī) 學(xué) 碩 士 ， 主 治 醫(yī) 師 ．T e l ：l 3l 8 6 01 6 8 3 41 材 料 和方 法 1 ． 1 材料 ： 質(zhì)粒型單純皰疹病 毒混合毒 株 d v H S V— G D N F ( 攜有大鼠全長(zhǎng)的 G D N F c D N A) 由中國(guó)預(yù)防 醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒基 因工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室吳小兵博 士提供。雌性成年 Wi s t a r 大 鼠( 約 2 0 0g ／ 只)

15、， 由北 京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn) 中心提供。G D N F購(gòu) 自北京 中山生物公司。1 ． 2方 法 1 ． 2 ． 1 脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元培養(yǎng) ： 將 已有方法 2改 良：無(wú)菌條件取出 E l 6天 Wi s t a r 大 鼠子宮 ， 分離胎 鼠脊 髓 ， 將其腹側(cè)半用胰 蛋白酶處理 、 稀釋 、 接種于六孔 板 ( 共 8 板 ) ， 置于培養(yǎng)箱。培養(yǎng)液為含 1 5 ％胎牛血 維普資訊 http://www.cqvip.com 西北

16、國(guó)防醫(yī)學(xué) 雜志 ( Me dJN D F N C) 2 0 0 5A u g ． ； 2 6 ( 4 )2 6 l去除 神經(jīng) 生 長(zhǎng) 因子 而誘 發(fā) 的 神經(jīng) 元凋 亡 。有 人 l 6發(fā) 現(xiàn) B c l 一 2能 明顯延 緩切斷坐 骨神經(jīng) 引起 的運(yùn)動(dòng)神 經(jīng)元 凋 亡 。本 實(shí)驗(yàn) 也 觀察 到 ， G D N F和 HS V—G D N F都具有增加 B c l 一 2 表達(dá) 、 減少運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元凋亡 的功 能。并發(fā) 現(xiàn) ， 受 損 后

17、第 1 、 3天 ， G D N F的功 效優(yōu) 于 H S V— G D N F ， 原因可能是 H S V— G D N F感染神經(jīng)元 后建 立 隱性 狀 態(tài) ， 此 時(shí) 尚 未 完 全 表 達(dá) 有 活 性 的G D N F ， 也可能是極少部分 H S V恢復(fù)野生型的緣故 ；受損 后 第 5 、 7天 ， H S V—G D N F的 功效 較好 ， 說(shuō) 明 H S V— G D N F 持續(xù)作用 的時(shí) 間較長(zhǎng)。這 也從側(cè)面說(shuō) 明了

18、 H S V— G D N F優(yōu)于 G D N F的原因可能是 H S V的 靶問(wèn)整合作用 ， 更有利于 G D N F的表達(dá) 。我們 還觀 察到在損傷后第 1 天 ， 兩組 的平均光密度均較高 ， 這 可能是神經(jīng)元受損后短期 內(nèi)的一個(gè)應(yīng)激反應(yīng) 。參考 文獻(xiàn) ：[ 1 ] A l l s o p pT E ， Wy a t t s ， P a t e r s o nF H ， e ta 1 ． T h ep r o t o o n c

19、o g e n eb c l — — 2a n ds e l e c t i v e l yl t ' e ~u en e u r o t r o p h i cf a c t o r． ． d e p e n d e n tn e u r o n sf r o ma p o p t o s i s [ J ] ． C e l l ， 1 9 9 3 ， 7 3 ( 2 ) ： 2 9 5 — 3 0 7 ．[ 2 ] D i

20、n gA i — s i f t ， W a ngF u一 ~u a ng ．C h a r a c t e r so fh i p p o c a m -p a ln e u r o I l ao fn e o n a t a lr a t si nf r e e8 e m mm e d i u m [ j ] ． C e l lB i o l o g yJ o u r n a l ，1 9 9 3 ，1 5 ( 3 ) ： 8 8—

21、 9 0 ．[ 3 ] Y uA C ， L e eY L ， E n gL F ．I n h i b i t i o no fG F A Ps y n t h e s i sb ya n t i s e n 3eR N Ai na s t r o e y t e a[ J ] ． JN e u n ~ c iR e s ， 1 9 9 1 ， 3 0( 1 ) ： 7 2—7 9 ．[ 4 ] 甘思德． 神經(jīng) 再生 問(wèn)題 與瞻 望 [

22、 J ] ． 生 理科 學(xué)進(jìn) 展 。 1 9 9 4 。2 5： 2 9 5—3 0 0．[ 5 ] G a r c i aI ，M a r t i n n o nI ， T s u j i m o t oY ，e t．P r e v e n t i o no fp r o g r a mm e dc e l ld e a t ho f s y m p a t h e t i cn e u r o n 3b yt h eB c l 一

23、2p r o t o o n c o g e n e[ J ] ． S c i e n c e ，1 9 9 2 ，2 5 8 ( 5 1 8 1 ) ： 3 0 2 —3 o 4 ．[ 6 ] D u b o i s —D a u p h i nM， F r a n k o w s k iH， T s u j i m o t oY。 e ta 1 ．Ne o n t a lmo t o n e u r o n so v e r ex

24、p r e a s i n gt heb c l一 2p r o t o o n c o -g e n ei nt r a n s g e n i cmi c ea r ep mt e e t e df r o m a x o t o my—i n d u c e dc e l ld e a t h [ J ] ．P r o cN a i lA c a dS ciU S A ， 1 9 9 4 ． ， 9 1 ( 8 ) ：3 3 O

25、 9 — 3 3 】 3 ．重 度 脊柱 后 凸畸 形 輸 尿 管 切 開(kāi)取 石 手 術(shù) 麻醉 處 理 1 例 王立文， 楊 少春 ， 閏喬生 ( 解放 軍第五 醫(yī)院麻 醉科 ， 寧夏 銀 川 7 5 0 0 0 4 )關(guān)鍵 詞 ： 麻 醉學(xué) ； 脊柱畸形 ； 輸 尿管手術(shù) 中圖分類(lèi)號(hào) ：R6 1 4文 獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ： D患者 ， 男 ， 6 4歲 。于 2 0 0 4— 0 6— 2 9擬在 硬膜外 麻醉 下行 右側(cè)輸 尿管切 開(kāi)取石術(shù)

26、 。術(shù)前 檢查 ： 呈桶狀胸 ， 心肺無(wú)異 常。脊柱 上胸 段 ( T．) 嚴(yán) 重后 凸 畸形 ， 頸椎 變 直 ， 不能后 仰 。x線檢查 ： 右側(cè)多發(fā) 陳舊性肋骨骨折 ， 胸椎 C o b b 角大 于 6 o 。 ， 椎 體骨質(zhì)增 生。心 電圖 ： 心肌 供血 不 足。肺 功能 檢查 ： 通 氣功 能輕度減退 。彩超診 斷 ： 右 輸尿 管上 段結(jié) 石 、 右 腎 積水 。各 項(xiàng)化驗(yàn)檢查正 常。術(shù)前 3 0r a i n 肌 注阿

27、托品 0 ． 5m g ， 地西泮 1 Om g 。入室先 靜 脈輸液 ， 右側(cè)臥位 ， 選擇 T 。 ． ， 間隙行硬 膜外 穿刺 ， 因椎 間隙 不甚 清楚 ， 先后采用直 入法及 側(cè) 入法 經(jīng) T | ．T 9 ． ． 。 兩個(gè) 椎間 隙穿刺均未 獲成 功 ， 放決定改 全麻 。應(yīng)用 “ 健 忘鎮(zhèn)痛 ” 慢誘導(dǎo) 清醒 氣管 內(nèi)插管 ， 靜吸復(fù)合麻 醉。 由于患 者不 能平 臥和頭不 能后 仰 ， 先將 其背部墊高呈半 臥位 ， 手

28、術(shù)床 面降低 ， 并 調(diào)整為 頭低 位( 呈 3 0 。 ) ， 然 后行 面 罩 吸氧 ， 1 ％ 丁 卡 因行 咽 喉部 表 麻 ， 給予咪唑 安定 3I I l g ， 并 環(huán)甲膜穿刺 注入 1 ％ 丁卡 因 2I I l l ，靜脈 注入氟哌利多 2 ． 5m g 、 芬太尼 0 ． 0 5m g 順利 插入氣管 導(dǎo) 收稿 日期 ： 2 0 0 5 — 0 2— 0 4作者簡(jiǎn) 介 ： 王立文( 1 9 5 3 一) 。 男 ，

29、副主任 醫(yī)師 。 T e l ： 0 9 5 1 — 2 9 8 6 1 3 1· 病例報(bào)告 ·管 ， 插管后 即給予丙泊酚 1 0 0m g 、 芬 太尼 0 ． 1mg 、 維 庫(kù)溴銨 6m g ， 并 微泵輸入丙 泊酚 + 瑞 芬太 尼 和吸入 安 氟醚維 持麻 醉。術(shù)中麻醉平穩(wěn) ， 手術(shù)過(guò)程順 利 ， 術(shù)畢 清醒 ， 拔除 氣管導(dǎo)管 送 回 病室 ， 術(shù)后 1 2d 痊 愈出院 。討論 ： 正 常人胸椎呈生理

30、 性后凸 ， 側(cè) 位 X片上 用 C o b b法 測(cè)量 的角 度為 2 0 。 一 4 0 。 ， > 4 0。 即為 異常 ， 稱(chēng)脊 柱后 凸畸形 。本例屬重 度脊柱后 凸畸形 ， 并伴 有心 、 肺 功能異常 ， 進(jìn)一 步追 述病 史 ， 患者 4 o 年前有過(guò)胸 部外傷史 ， 按脊柱后 凸畸形 分類(lèi) 為 “ 創(chuàng) 傷性 ” 。因術(shù)前 已經(jīng) 明確 脊柱畸形 的診 斷 ， 故事先應(yīng)該 考慮 到行 脊椎穿刺可 能困難 ， 以首 選

31、氣 管內(nèi)插管全 身麻 醉為 好 ， 不宜用硬膜外 麻 醉 ， 以免 因穿 刺 困難 浪費(fèi)時(shí) 間 和增 加麻 醉風(fēng)險(xiǎn) ， 此點(diǎn)應(yīng)汲取 經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn) 。由于本 例脊柱畸形 的病史較 長(zhǎng) ， 并出現(xiàn) 了代償 性頸 椎 和腰椎 的前 凸 ， 尤其是 頸椎 同時(shí)存 有不 同程 度的骨質(zhì)增 生 ( x線片 顯示 ) ， 頭不 能后 仰 ， 為防 止 氣管插管 困難 ， 我們 采用清醒氣管 內(nèi)插 管法 ， 通過(guò)墊 高背部 、調(diào)整手術(shù)床 面 ， 以達(dá) 到