紫癜腎Ⅰ號方對體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞的影響.pdf

1、目的：(1)摸索優(yōu)化大鼠腎小球系膜細胞(rGMC)原代培養(yǎng)的方法。(2)觀察紫癜腎I號方對體外培養(yǎng)rGMC在細胞增殖、活性氧(ROL)產生及轉化生長因子-β1(TGF-β1)、巨噬細胞移動抑制因子(MIF)表達方面的影響，探討其在兒童HSPN治療中可能的作用機制，為進一步優(yōu)化該方的配伍組成及提高中西醫(yī)結合在兒童HSPN診治中的應用提供實驗依據。 方法：(1)采用不同方法原代培養(yǎng)rGMC并行形態(tài)學和間接免疫熒光染色鑒定，摸索各種有

2、利于rGMC原代培養(yǎng)的方法與條件。(2)采用不同劑量的紫癜腎I號方水提液干預原代培養(yǎng)的rGMC，并以黃芪注射液為參照，比較各組培養(yǎng)細胞在細胞增殖及培養(yǎng)上清液SOD水平上的差別：采用紫癜腎I號方水提液及IFN-γ干預原代培養(yǎng)的rGMC，觀察二者對培養(yǎng)上清液TGF-βl水平的影響。(3)制備并采用不同濃度的紫癜腎I號方含藥血清干預體外培養(yǎng)的rGMC細胞株，觀察其在細胞增殖、培養(yǎng)上清液SOD值和活性氧清除單位及MIFmRNA表達水平上的差別。

3、 結果： (1)rGMC的原代培養(yǎng)與鑒定結果：培養(yǎng)細胞經形態(tài)學及間接免疫熒光染色鑒定證明為rGMC。在培養(yǎng)方法上，采用“植塊”法可有效解決腎小球不貼壁的難題，且能降低成本、縮短培養(yǎng)周期；改良的消化傳代方法有助于減少操作中對細胞的損傷，并可增加細胞的回收量；換液操作中采用減少培養(yǎng)液用量，增加換液頻率及實行半量換液等方法更有利于原代培養(yǎng)rGMC的生長增殖。 (2)不同條件下體外培養(yǎng)rGMC的OD值：在24h時點上，低

4、、中、高濃度紫癜腎I號方水提液組的OD值分別為(0．0568±O．0042)、(O．0362±0．0037)和(O．0362±0．0031)，顯著低于對照組(0．0790±0．0047)及黃芪注射液組(0．0747±0．0058)(均p<0．01)。在48h時點上，低、中、高濃度紫癜腎I號方水提液組的OD值分別為(0．0780±0．0063)、(0．0712±0．0041)和(0．0731±0．0045)，也顯著低于對照組(0．1260

5、±0．0054)及黃芪注射液組(0．0995±0．0046)(均p

6、位值：在24h時點上，低、中、高濃度紫癜。腎I號方水提液組的SOD值分別為[(18．143±5．078)U／m1]、[(22．765±3．146)U／m1]和[(29．157±1．969)U／m1]，顯著高于對照組[(10．866±3．766)U／m¨(均p

7、2．353)U／m1]，也顯著高于對照組[(18．230±2．693)U／m1](均p<0．01)在紫癜腎I號方含藥血清干預rGMC細胞株24h后，高濃度紫癜腎I號方含藥血清組的SOD值為[(50．993±L214)U／m1]，顯著高于對照組[(46．696±2．093)U/ml]和低濃度紫癜腎I號方含藥血清組[(47．136±2．278)U／m1](均P

8、678±0．717)U／m1]、[(67．561±O．567)U／m¨及[(67．834±O．674)U／m1]，顯著高于對照組[(65．934±1．174)U／m1](／KO．05，P(O．0l，／KO．01)。 (4)不同條件下細胞培養(yǎng)上清液中的TGF-βl水平：在24h時點上，紫癜腎I號方水提液聯合IFN-Y組的TGF-Bl水平[(86．634±69．151)pg／m1]顯著低于IFN-Y組[(199．545±59．097

9、)pg／m1](PlO．05)。在48h時點上，與對照組[(153．561±50．978)pg／m1]相比，紫癜腎I號方水提液聯合IFN-Y組的TGF-β1水平[(67．766±59．649)pg／m1]有顯著下調(BiO．05)。(5)不同濃度紫癜腎I號方含藥血清條件下rGMC的MIFmRNA表達水平：低、中、高濃度紫癜腎I號方含藥血清組的MIF／GAPDH比值分別為：(16．902±6．794)、(10．039±4．201)及(3．