乳腺癌基因組表達譜中miRNA的血清學差異性表達分析.pdf

1、背景與目的：
　　 miRNA具有較好的組織特異性，在不同腫瘤中具有特定的表達模式，在乳腺癌、肝癌、肺癌、腸癌、卵巢癌等多種惡性腫瘤中得到了證實。腫瘤組織中的miRNA表達譜與腫瘤發(fā)生及預后相關，但是檢測技術復雜、創(chuàng)傷大，且必須在手術之后才能獲得標本，難以真正應用于臨床。相比較而言，外周血血清較易獲得和檢測，臨床應用便捷，利于推廣，血清miRNA一經發(fā)現，便引起了研究者的極大興趣。血清miRNA作為腫瘤標志物的研究仍存在許多問題

2、，如血清miRNA所發(fā)揮的生物學功能尚未明確，血清和組織miRNA水平的相關性仍存在爭議等。本研究旨在探討乳腺癌患者血清miRNA的表達水平與乳腺癌組織內miRNA的表達情況是否一致，并進一步闡明血清miRNA作為乳腺癌診斷、治療的生物學標志物的可行性和臨床應用價值。本研究對上述問題的闡明，將有助于加快血清miRNA作為腫瘤生物標志物向臨床轉化的應用進程，為腫瘤早期診斷、判斷生物學行為及預后評估提供新思路。
　　 方法：

3、　　 利用miRNA芯片對8對乳腺癌組織及配對的癌旁組織中miRNA表達譜進行分析，并利用實時熒光定量RT-PCR對芯片結果進行驗證，篩選出差異性表達的目的miRNA。另選取天津醫(yī)科大學附屬腫瘤醫(yī)院2011年3-10月經病理診斷明確的乳腺癌患者165例，同時選取我院體檢的健康女性120例為對照組，采用實時定量聚合酶鏈反應(real-time RT-PCR)測定血清中目的miRNA相對表達量。
　　 結果：
　　 1.利

4、用miRNA芯片對8對乳腺癌組織及配對的癌旁組織中924種miRNA表達情況進行分析，共篩選出23種差異性表達的miRNA，其中hsa-miR-155和hsa-miR-193b表達上調，hsa-miR-145、hsa-miR-381、hsa-miR-132、hsa-miR-206、hsa-miR-199b-5p、hsa-miR-100、hsa-miR-335、hsa-miR-497、hsa-miR-99a、hsa-miR-10b、hsa

5、-miR-125b、hsa-let-7b、hsa-miR-10a、hsa-miR-126、hsa-miR-30a、hsa-miR-143、hsa-miR-125a-5p、hsa-miR-19b、hsa-miR-26a、rno-miR-324-3p表達下調，hsa-miR-10b在有淋巴結轉移的乳腺癌組織中表達上調，而在無淋巴結轉移的乳腺癌組織中表達下調。
　　 2.用miRNA real time RT-PCR對芯片篩查的結果進

6、行驗證，共篩選出10種差異性表達的miRNA，其中，hsa-miR-155和hsa-miR-193b表達上調，hsa-miR-100、hsa-miR-206、hsa-miR-381、hsa-miR-132、hsa-miR-199b-5p、hsa-miR-497和hsa-miR-99a表達下調，miRNA-10b在有淋巴結轉移的乳腺癌組織中表達上調，而在無淋巴結轉移的乳腺癌組織中表達下調。以差異表達量大于2倍，RT-PCR中CT值小于30

7、作為標準，共篩選出4種miRNA，即miR-10b、miR-100、miR-155以及miR-206進行下一步的血清學表達分析。
　　 3.本研究共對165例乳腺癌患者和120例健康對照組血清中目標miRNA表達情況進行了定量分析，結果表明miRNA在血清中穩(wěn)定表達。
　　 4.對照組與乳腺癌組miR-100、miR-155及miR-206相對表達量比較，差異均有統計學意義(P＜0.05);兩組miR-10b相對表達量比

8、較，差異無統計學意義(P＞0.05)。乳腺癌患者血清中4種目標miRNA的表達情況與前期乳腺癌組織中的表達情況一致。
　　 5.miR-10b、miR-155和miR-206的表達與乳腺癌某些臨床病理特征相關，其中miR-10b與淋巴結狀態(tài)相關，無淋巴結轉移組miR-10b的表達水平低于正常對照組(P=0.001)，而淋巴結轉移組miR-10b的表達量顯著高于正常對照和無淋巴結轉移組(P=0.001，0.001)。miR-206

9、的表達水平在不同分子分型間存在差異(P=0.040)，miR-206的表達與雌激素受體狀態(tài)相關，在ER陽性組中miR-206的下調更加顯著(P=0.035)。miR-155的表達與臨床分期(P=0.001)、Ki-67(P=0.001)、突變型P53(P=0.027)相關，臨床分期晚、Ki-67高表達、突變型P53陽性組miR-155上調更加顯著。
　　 結論：
　　 1.通過miRNA組織芯片初步篩選以及real ti

10、me RT-PCR驗證，本研究共發(fā)現10種miRNA在乳腺癌組織及相應的癌旁組織中存在顯著性差異，初步建立了乳腺癌特異性的miRNA差異表達譜，為miRNA在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中作用機制的深入闡明奠定了基礎，為乳腺癌診斷提供了新的潛在的生物學標志物。
　　 2.研究顯示，血清miRNA的表達模式與乳腺癌組織存在良好的一致性，因此血清可以作為乳腺癌相關miRNA研究的標本來源，相對于組織來講更具有臨床應用價值。
　　 3.血清