新型腺病毒載體及其攜帶TRAIL基因的抗腫瘤研究.pdf

1、腫瘤的發(fā)生往往與基因突變有關(guān)，因此，腫瘤的基因治療，尤其是靶向基因治療就有重要意義。 腫瘤特異性增殖腺病毒(即溶瘤腺病毒)，是目前最具前景的靶向基因治療載體之一。單靶向溶瘤腺病毒的特異性還不夠強(qiáng)，故我們又構(gòu)建了雙靶向溶瘤腺病毒載體。腺病毒復(fù)制最重要的元件是其E1區(qū)，特別是E1A區(qū)，我們用癌癥特異性啟動子hTERT代替E1A本身的啟動子，變成AdhTERT。同時我們將E1A CR2區(qū)的24bp堿基刪除，則E1A(△24)蛋白質(zhì)不能

2、與Rb結(jié)合，抑制了細(xì)胞周期。上述構(gòu)建物簡寫為AdhTERT·E1A(△24)即為雙靶向溶瘤腺病毒載體，此腺病毒只能靶向癌細(xì)胞。 傳統(tǒng)的外源性啟動子如hCWV等調(diào)控外源基因表達(dá)，由于其活性不受病毒生活史的調(diào)控，使其成為一種不安全因素。如用病毒內(nèi)源性啟動子調(diào)控外源基因表達(dá)可以提高基因治療的安全性。本實驗在構(gòu)建腺病毒載體時，剔除了腺病毒E3區(qū)的6.7K和GP19k基因，僅保留E3區(qū)內(nèi)源性啟動子及其調(diào)控部分，以達(dá)到腺病毒內(nèi)源性啟動子調(diào)控

3、外源基因表達(dá)的目的。因此，我們構(gòu)建了小載體pCZ203，缺失E3區(qū)以方便插入外源基因。在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步構(gòu)建了攜帶外源基因的小載體質(zhì)粒pCZ204-gene，通過其與含AdhTERT·E1A(△24)的質(zhì)粒pCN103重組，獲得雙靶向并由內(nèi)源性啟動子控制外源基因表達(dá)的AdhTERT·E1A(△24)E3-gene的病毒，簡稱AdCN204-gene。其中AdCN204-EGFP的構(gòu)建是本課題的第一部分內(nèi)容。實驗結(jié)果顯示，AdCN204-

4、EGFP具有很強(qiáng)的腫瘤靶向性和較高的安全性。 按照導(dǎo)師劉新垣院士所提出的靶向基因病毒治療策略，我們利用目前非常有應(yīng)用前景的治療基因TRAIL構(gòu)建了AdCN204-TRAIL，深入研究其在體外和體內(nèi)對肝癌的療效。實驗結(jié)果顯示，AdCN204-TRAIL能特異地侵入腫瘤細(xì)胞并高效介導(dǎo)TRAIL的表達(dá)，對體外腫瘤細(xì)胞系有明顯的殺傷能力，更為重要的是其在體內(nèi)也顯著的抑制了腫瘤生長，有的腫瘤甚至完全消失。這應(yīng)該是一項很有重要意義的成果。A