慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化生長因子β不敏感腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞的構(gòu)建及鑒定.pdf

1、Y1407175分類號：R73051密級；學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：學(xué)號：l006220052039又蚌醬耕鼻垮Tl矗NJIHMEDICAlUNlVERSITY碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATl0N論文題目：慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化生長因子p不敏感腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞的構(gòu)建及鑒定TITLEConstructionandidentificationoflentivirusmediatedtransforming

2、growthfactorpinsensitivetumorspecificcytotoxicTlymphocyte一級學(xué)科：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：病理學(xué)與病理生理學(xué)論文作者：張婷指導(dǎo)教師：暢繼武教授導(dǎo)師組成員：王海濤天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二OOA年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩十學(xué)位論文析不同類型CTL磷酸化的Smad2／3(PSmad2／3)量可以鑒別其對TGF[3的敏感性。表達TRANSglytk的CTL為對照。結(jié)果l利用重組PCR技術(shù)連接T13RI

3、IDN(TRANS)與HsVtk連接起來轉(zhuǎn)入慢病毒載體，測序驗證正確，成功構(gòu)建了表達TflRIIDNglytk及對照TRANSglytk的慢病毒。2外周血來源PBMC，在IL4、GMCSF誘導(dǎo)下，可得到DC。負載腫瘤抗原DC，激活T細胞，可使其大量擴增，得到腫瘤特異性CTL。3以慢病毒為載體可將TBRIIDNtk基因轉(zhuǎn)染到腫瘤特異性CTL，Antiv5TIFC熒光抗體染色證實了轉(zhuǎn)染成功，Westemblot檢測PSmad2／3蛋白表達明

4、顯減少，證明轉(zhuǎn)染TBRIIDNglytk基因后TGFt3信號傳導(dǎo)通路阻斷，對正常表達的TGFBII型受體產(chǎn)生了競爭性抑制作用。4轉(zhuǎn)染TBRIIDNtk，TRANS基因?qū)α馨图毎硇?，凋亡，周期無明顯影響。GCV對攜帶HSVtk自殺基因的TGF13不敏感CTL殺傷活性結(jié)果表明GCV能夠殺死經(jīng)慢病毒轉(zhuǎn)染后表達HSVtk的細胞，而未轉(zhuǎn)染組細胞幾乎無死亡。結(jié)論對TGFp不敏感腫瘤特異性CTL培養(yǎng)成功及鑒定表明：這一方法在腫瘤免疫治療中具有潛在的