人食管胃連接部和食管下括約肌解剖、組織學(xué)以及神經(jīng)遞質(zhì)受體表達(dá)的研究.pdf

1、由于人食管下括約肌(LES)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能的復(fù)雜性，LES的調(diào)節(jié)機(jī)制一直是困擾學(xué)術(shù)界的難題。 本實(shí)驗(yàn)究采用人的食管胃連接部和LES肌束為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，應(yīng)用內(nèi)窺鏡技術(shù)、電鏡技術(shù)、免疫組織化學(xué)技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)等，除了對(duì)食管胃連接部解剖學(xué)和組織學(xué)進(jìn)行研究外，重點(diǎn)對(duì)LES兩束鉤狀纖維和套索纖維的神經(jīng)遞質(zhì)受體分布和活性的差異進(jìn)行初步研究，從而為L(zhǎng)ES功能研究、胃食管反流病和食管功能障礙性疾病的治療打下基礎(chǔ)。 本研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如

2、下：第一部分食管胃連接部和食管下括約肌的解剖學(xué)、組織學(xué)研究目的：研究食管胃連接部和食管下括約肌的解剖學(xué)、組織學(xué)特點(diǎn)，為食管下括約肌的抗返流機(jī)制提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 方法：1對(duì)30例正常食管胃連接部進(jìn)行胃鏡觀察，同時(shí)胃鏡觀察返流性食管炎、食管裂孔疝患者各5例。 2在10具尸體上，對(duì)食管胃連接部進(jìn)行解剖學(xué)觀察，觀察食管腹段長(zhǎng)度、食管胃粘膜線(Z線)的位置和形態(tài)、食管和胃底的夾角(His角)、膈食管裂孔的解剖特點(diǎn)。 3在手

3、術(shù)標(biāo)本上觀測(cè)各段食管肌層的厚度差異以及食管下括約肌纖維形態(tài)特征。 4顯微鏡下觀察Z線上下食管粘膜和胃粘膜的上皮類(lèi)型、食管下括約肌的細(xì)胞形狀、細(xì)胞排列狀況、胞漿是否豐富、細(xì)胞核的形狀和染色狀況；電鏡下觀察LES細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：1胃鏡下觀測(cè)結(jié)果1.1正常食管胃連接部：30例胃鏡觀測(cè)顯示食管胃粘膜線呈齒狀或環(huán)狀，粘膜界限清楚，其中呈齒狀的21例，呈環(huán)狀的9例。A環(huán)位于食管下端距賁門(mén)口約2cm處，它收縮頻繁，銳利而有力；

4、膈壺腹(ampulla)是A環(huán)和膈裂孔之間一膨大部分，長(zhǎng)約1.5～2cm，形態(tài)變化很大。 2尸體解剖的觀測(cè)結(jié)果2.1食管胃粘膜線兩側(cè)粘膜顏色對(duì)比明顯，食管粘膜呈灰白色，胃粘膜呈暗紅色，粘膜線上方的食管粘膜有數(shù)條縱性皺襞，下方的胃粘膜皺襞里放射狀或橫行排列。食管胃粘膜線多位于膈與賁門(mén)口平面之間的達(dá)80％，距賁門(mén)口平面1.6±0.9cm。 3新鮮標(biāo)本的觀測(cè)結(jié)果3.1不同部位食管肌層厚度的測(cè)量：食管下段距賁門(mén)口4cm一段管壁肌

5、層厚度較食管上、中段的肌層厚度明顯蹭厚，而且差異非常顯著(P＜0.05)。 4顯微鏡下觀測(cè)結(jié)果4.1食管胃粘膜線的觀察：食管胃粘膜線上下的食管粘膜上皮和胃粘膜上皮分別為扁復(fù)層鱗狀上皮和單層柱狀上皮。 5電子顯微鏡下觀測(cè)結(jié)果5.1掃描電鏡下的觀察：食管體部肌纖維的表面比較平滑，LES肌纖維表現(xiàn)隆起外突，使得LES肌束外觀上顯得比食管體部的肌束更粗大。 結(jié)論：1食管胃粘膜線與賁門(mén)口不處于同一平面，高于賁門(mén)口水平1.6

6、±0.9cm。。 2食管上、中段與距賁門(mén)口4cm以內(nèi)的下段食管肌層厚度差異非常顯著，距賁門(mén)口4cm范圍內(nèi)的食管肌層明顯厚于食管上、中段的食管肌層。 3套索纖維和鉤狀纖維細(xì)胞漿內(nèi)有較多的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線立體，表明其能量代謝率高于其它食管肌細(xì)胞。 第二部分人食管下括約肌M2、M3受體和D4、D5受體的免疫組化研究目的：探尋人食管下括約肌的多巴胺和乙酰膽堿受體的表達(dá)和分布的情況，揭示食管下括約肌的抗返流功能的內(nèi)在機(jī)制。

7、 方法：應(yīng)用免疫組化的方法，研究鉤狀纖維和套索纖維以及食管環(huán)形肌、胃底環(huán)形肌、食管粘膜、胃粘膜的M2、M3和D4、D5分布與表達(dá)。表達(dá)程度的判定標(biāo)準(zhǔn)按Shimizu法，用卡方檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：1M2和M3的表達(dá)情況在25例食管粘膜、胃粘膜中，M2、M3均呈低表達(dá)；M2、M3在食管和胃粘膜中的表達(dá)無(wú)顯著差異； 結(jié)論：在鉤狀纖維、套索纖維中，存在M2、M3受體和D4、D5受體，其中M2、M3均高表達(dá)；D

8、4、D5均低表達(dá)。 第三部分應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)人食管下括約肌M2、M3受體和D4、D5受體的基因表達(dá)目的：探尋人食管下括約肌的多巴胺和膽堿能受體基因表達(dá)和分布的情況，從分子水平揭示食管下括約肌的抗返流機(jī)制。 方法：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)方法(RT-PCR)，研究鉤狀纖維和套索纖維的M2mRNA、M3mRNA和D4mRNA、D5mRNA分布與表達(dá)。 通過(guò)凝膠成像分析系統(tǒng)照相并對(duì)圖象進(jìn)行分析，待測(cè)受體基因的表達(dá)

9、水平以待測(cè)受體基因灰度值與內(nèi)參灰度值的比值表示。用方差分析和t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果：1M2mRNA和M3mRNA的表達(dá)情況在25例食管粘膜、胃粘膜中，M2mRNA和M3mRNA的表達(dá)水平均呈低表達(dá)，二者無(wú)顯著性差異；在25例食管環(huán)行肌、胃底環(huán)行肌、鉤狀纖維、套索纖維中，M2mRNA的表達(dá)水平分別為0.394±0.054，0.398±0.047，0.411±0.023，0.409±0.044，四者均高表達(dá)，且四者間無(wú)顯

10、著性差異；在25例食管環(huán)行肌、胃底環(huán)行肌、鉤狀纖維、套索纖維中，M3mRNA的表達(dá)水平分別為0.133±0.043，0.136±0.075，0.141±0.016，0.145±0.023，四者均高表達(dá)，且四者間無(wú)顯著性差異。在以上四種肌組織中，M2mRNA表達(dá)明顯高于M3mRNA，二者有顯著差異(P＜0.01)；M2、M3在食管粘膜、胃粘膜的表達(dá)明顯低于在后四種肌組織中的表達(dá)，有顯著性差異(P＜0.01)。 結(jié)論：在鉤狀纖維、套

11、索纖維中，存在豐富的M2AchR、M3AchR，同時(shí)也存在著D4DR、D5DR。在平滑肌的運(yùn)動(dòng)功能上，與M3AchR相比，M2AchR處于優(yōu)勢(shì)。 結(jié)論1食管上、中段與距賁門(mén)口4cm以內(nèi)的下段食管.壁肌層厚度差異非常顯著，距賁門(mén)口4cm范圍內(nèi)的食管壁肌層明顯厚于食管上、中段的食管壁肌層。 2在LES肌細(xì)胞中，可見(jiàn)大量粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體，提示LES肌細(xì)胞中能量代謝較高。 3LES肌細(xì)胞中存在M2，M3，D4和D5，而