miR-126靶向血管內(nèi)皮生長因子A調(diào)控胃癌血管新生的作用及其機(jī)制.pdf

1、目的：隨著人類腫瘤研究的深入，腫瘤血管新生在決定腫瘤生長、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的過程中起至關(guān)重要的作用現(xiàn)已為人熟知。在腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移過程中，血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor, VEGF）家族扮演著重要的角色，它在腫瘤組織血管內(nèi)皮細(xì)胞、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂增殖過程中起關(guān)鍵作用，是目前活性最強(qiáng)、專屬性最高的血管生成因子，在腫瘤血管生成中處于核心地位，VEGF家族有7個(gè)成員，即:VEGFA、

2、VEGFB、VEGFC、VEGFD、VEGFE、svVEGF及胎盤生長因子。其中VEGFA在血管生成中發(fā)揮最重要的作用。大量的研究包括我們前期的研究發(fā)現(xiàn)，胃癌(Gastric cancer GC)過高表達(dá)VEGF和VEGFR，其過表達(dá)與胃癌的血管新生及惡性表型密切相關(guān)，是胃癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測因素。Feng R等研究發(fā)現(xiàn)，與正常組織相比較，miR-126在胃癌組織中有著明顯的低表達(dá)，并且這種低表達(dá)與腫瘤的臨床特征，包括腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、

3、局部侵犯及TNM階段密切相關(guān)。但目前有關(guān)miR-126靶向VEGFA調(diào)控胃癌血管新生的作用及具體機(jī)制尚未見報(bào)道。我們研究擬通過建立穩(wěn)定的miR-126過表達(dá)和抑制表達(dá)的GC細(xì)胞系，來分析GC細(xì)胞系PI3K/Akt和MAPK/Erk兩條信號(hào)通路上核心蛋白、VEGFA與miR-126之間的關(guān)系，從而來闡明GC細(xì)胞中miR-126的表達(dá)與胃癌血管新生的關(guān)系。
　　方法：⑴細(xì)胞系的選擇:來源于南昌大學(xué)消化研究所的共四株細(xì)胞系，分別為SGC

4、-7901、MKN-45、AGS、MKN-28細(xì)胞，通過熒光定量PCR檢測它們miR-126的表達(dá)量。⑵預(yù)處理GC細(xì)胞的miR-126表達(dá)的檢測:熒光定量PCR檢測在MKN-28、SGC-7901、MKN-45細(xì)胞預(yù)處理之后的miR-126的表達(dá)。⑶GC細(xì)胞系實(shí)驗(yàn):分空白組、miR-126慢病毒實(shí)驗(yàn)組、慢病毒對照組、miR-126寡核苷酸抑制組與寡核苷酸對照組共五組。利用上述預(yù)處理分別誘導(dǎo)和抑制胃癌細(xì)胞miR-126的表達(dá)，在處理之后7

5、2h提取細(xì)胞蛋白，通過Western Blot檢測分析預(yù)處理對Akt、mTOR、Erk1/2、VEGFA蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：①通過熒光定量PCR檢測四株胃癌細(xì)胞系miR-126的表達(dá)量由高到低依次為AGS＞MKN-45＞SGC-7901＞MKN-28。②Lenti-miR-126處理GC細(xì)胞之后，miR-126的表達(dá)明顯高于空白對照組及慢病毒對照組(p＜0.01);相反，LNA-miR-126處理GC細(xì)胞后，miR-126

6、的表達(dá)明顯低于空白對照組及寡核苷酸對照組(p＜0.01)。③在MKN-28、SGC-7901、MKN-45細(xì)胞中，miR-126的高表達(dá)可抑制Akt、mTOR、Erk1/2、VEGFA蛋白表達(dá)(p＜0.05或0.01)，相反，miR-126低表達(dá)可促進(jìn)Akt、mTOR、Erk1/2、VEGFA蛋白表達(dá)(p＜0.05或0.01)。
　　結(jié)論：推測在胃癌細(xì)胞中miR-126靶向作用于VEGFA通過PI3K/Akt和（或）MAPK/Er