利用RNAi建立Survivin沉默的細胞株及對Survivin功能的研究.pdf

1、SurVivin基因(SVV)是1997年由耶魯大學的DC.Altirei克隆的一個抗凋亡基因，屬于IAP家族。Survivin基因的組織分布特征具有明顯的細胞選擇性，這一點與IAP家族的其他成員不同。研究發(fā)現(xiàn)Survivin基因表達于胚胎和發(fā)育的胎兒組織，而在正常的終末分化的成人組織中沒有表達。但是在大多數(shù)的腫瘤組織中有Survivin基因的異常高表達，并且其表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及預后有關(guān)。這些都提示我們Survivin基因在腫瘤

2、的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用，是一個有潛在價值的腫瘤標志，與腫瘤的預后密切相關(guān)，可作為腫瘤基因治療的新靶點。 RNA干擾技術(shù)(RNAl)是近年來新興的基因功能分析、抗腫瘤和抗病毒的有利工具，正在功能基因組學領(lǐng)域掀起一場真正的革命，被Science評為2001年最重要的成果之一，在很多方面有廣泛的應用前景。而siRNA的制備作為RNAl技術(shù)的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)，雖然已經(jīng)有了各種制備方法，但是都有其相應的缺陷。探討一種快速高效保質(zhì)保量的si

3、RNA制備方法對RNAi技術(shù)的開展具有重要的實際意義。 在本課題中，研究凋亡抑制基因Survivin野生型(簡寫為Survivin)及其異構(gòu)體Survivin-AEx3(簡寫為Sur-△)在肝細胞癌中的mRNA表達情況，確定兩者在腫瘤組織中的高表達；同時分別研究兩者與肝細胞癌(HCC)臨床各項指標之間的關(guān)系，從而探討兩者在評價HCC侵襲性和癌癥進展中的價值。探討兩步PCR擴增shRNA表達框架，建立Survivin沉默的HepG