慢病毒介導(dǎo)的survivin基因穩(wěn)定干擾對PC-3細(xì)胞株體內(nèi)外生長的影響.pdf

1、第一部分Survivin基因穩(wěn)定干擾PC-3細(xì)胞系的建立 目的 構(gòu)建survivin基因穩(wěn)定干擾的PC-3細(xì)胞系。 方法 設(shè)計針對survivin基因的shRNA序列，構(gòu)建survivin shRNA慢病毒載體并感染PC-3細(xì)胞，采用RT-PCR和流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測survivin mRNA和蛋白表達(dá)水平，并與陰性對照組和空白對照組PC-3細(xì)胞比較。 結(jié)果 Survivin shRNA慢

2、病毒載體感染PC-3細(xì)胞后survivin mRNA和蛋白水平分別為(5.89±0.12)％和(11.82±0.32)％，明顯低于陰性對照組(55.17±0.87)％、(95.70±1.56)％和空白對照PC-3細(xì)胞(58.21±0.68)％、 (95.90±1.78)％。 結(jié)論 采用shRNA慢病毒載體成功構(gòu)建了survivin基因穩(wěn)定干擾的PC-3細(xì)胞系。 第二部分Survivin基因穩(wěn)定干擾對PC-3細(xì)胞的

3、生長及凋亡的情況 目的研究survivin基因穩(wěn)定干擾對PC-3細(xì)胞凋亡及生長的影響。 方法對PC-3細(xì)胞、PC-3/c細(xì)胞、PC-3/i細(xì)胞分別行western-blot檢測caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)水平；流式細(xì)胞學(xué)檢查各組細(xì)胞凋亡水平；細(xì)胞計數(shù)比較各組細(xì)胞生長。 結(jié)果各組細(xì)胞caspase-3的相對表達(dá)量分別為：PC-3細(xì)胞組(0.210±0.021)、PC-3/c細(xì)胞組(0.240±0.019)、PC-3

4、/i組(0.574±0.041)；PC-3細(xì)胞組和PC-3/c細(xì)胞組凋亡比率分別為2.3％和2.6％、PC-3/i細(xì)胞組凋亡比率為22.5％；PC-3/i細(xì)胞生長明顯慢于PC-3和PC-3/i細(xì)胞。 結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的survivin基因穩(wěn)定干擾能在體外促進(jìn)PC-3細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞生長。 第三部分Survivin基因穩(wěn)定干擾對PC-3裸鼠移植瘤生長的影響 目的研究survivin基因穩(wěn)定干擾后PC-3裸鼠皮下移植

5、瘤的生長和凋亡情況。 方法采用細(xì)胞懸液皮下接種的方法制作PC-3皮下裸鼠移植瘤，接種一周后開始測量腫瘤大小、并繪制移植瘤生長曲線；接種后第七周，處死裸鼠，稱腫瘤重量，腫瘤標(biāo)本行TUNEL檢測腫瘤組織凋亡水平。 結(jié)果7周后各組腫瘤大小、重量分別為PC-3/i組：236.1±51.2 mm<'3>、0.21±0.04g；PC-3組：932.8±113.2 mm<'3>、0.75±0.12g；PC-3/c組：930.9±115