RNA干擾技術抑制IGF1R表達誘導肺癌細胞及腫瘤對DDP的增敏作用.pdf

1、目的:評價RNA干擾(RNA interference,RNAi)技術對人肺癌A549細胞系中胰島素樣生長因子1類受體(IGF1R)表達的阻斷效應,以及IGF1R基因沉默后腫瘤在細胞水平和動物水平對化療藥物敏感性的改變及其機制。方法:應用U6啟動子介導DNA模板轉錄生成短發(fā)夾樣RNA(siRNA)并轉染人肺癌A549細胞株,經RT-PCR和Western blot檢測IGF1R表達的改變;聯(lián)合應用化療藥物順鉑(DDP),通過MTT法,流

2、式細胞技術觀察細胞生長,細胞周期,細胞凋亡及DDP半數致死量(IC50)的變化;建立荷瘤裸鼠肺癌模型,腹腔注射DDP,觀察沉默IGF1R表達對裸鼠體內腫瘤生長情況的影響,并應用TUNEL法檢測瘤內細胞凋亡情況;進一步分析IGF1R信號通路中Erk和Akt磷酸化程度,探索其可能的作用機制。結果:成功構建靶向IGF-1R的siRNA表達載體和對照組表達載體,分別命名為pIGF1R-siRNA1、pIGF1R-siRNA2和pcontrol-

3、siRNA。pIGF1R-siRNA1和pIGF1R-siRNA2轉染組IGF1R mRNA表達量分別是對照組的(20.1±3.4)％和(77.8±3.9)%,蛋白表達量分別是對照組的(9.2±2.1)%和(44.9±4.1)%,組間具有顯著性差異(p<0.05)。沉默IGF1R表達同步伴隨ERK和Akt磷酸化受抑。抑制IGF1R表達使DDP對腫瘤細胞24h、48h、72h的IC50均明顯減少,IGF1R-siRNA1組DDP作用72h

4、的IC50為0.92mg/L,明顯低于control-siRNA組的3.77 mg/L,0.5 mg/L DDP聯(lián)合IGF1R-siRNA1作用48h后,A549細胞的生長抑制率達32.1%,明顯高于control-siRNA組的18.9%,細胞凋亡率從27.8%上升致44.2%;腹腔內注射DDP能有效抑制裸鼠體內腫瘤生長,瘤體重量DDP+control-siRNA組為PBS組的45.8%,DDP+IGF1R-siRNA組為PBS組的1