RNA干擾技術(shù)抑制SHBG基因表達(dá)對人滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　培養(yǎng)人滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR8-SVneo)，通過RNA干擾技術(shù)抑制性激素結(jié)合球蛋白(Sex hormone binding globulin，SHBG)基因表達(dá)，從而研究SHBG的生物學(xué)行為。
　　方法：
　　將人滋養(yǎng)細(xì)胞分成6組:(1)空白對照組(2)轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組(3)轉(zhuǎn)染非特異性siRNA組(4)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅠ(5)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅡ(6)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅢ，于轉(zhuǎn)染24小時后采用Realti

2、me PCR及WesternBlot方法檢測各組滋養(yǎng)細(xì)胞中SHBG的表達(dá)。利用Hoechst33258染色法檢測細(xì)胞凋亡，RealtimePCR及Westernblot方法測定凋亡相關(guān)抗體caspase3 mRNA及蛋白的表達(dá)水平。采用SPSS軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　成功培養(yǎng)人滋養(yǎng)細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24小時檢測SHBGmRNA表達(dá)量。結(jié)果如下:(1)空白對照組設(shè)為1;(2)轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組0.9522＜±0.3065;(3)轉(zhuǎn)染

3、非特異性siRNA組1.881±0.5839;(4)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅠ0.1115±0.0379;(5)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅡ0.1817±0.1367;(6)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅢ0.1364±0.02845。可見轉(zhuǎn)染特異性siRNA后SHBG表達(dá)減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Western Blot檢測SHBG蛋白條帶各轉(zhuǎn)染組較對照組表達(dá)明顯降低。各組細(xì)胞于轉(zhuǎn)染24小時后進(jìn)行Hoechst33258染色法檢測細(xì)胞凋亡

4、，熒光顯色后可見轉(zhuǎn)染組致密濃染顆粒較對照組明顯增加，RealtimePCR檢測caspase3 mRNA表達(dá)量結(jié)果如下:(1)空白對照組設(shè)為1;(2)轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組1.004＜±0.1971;(3)轉(zhuǎn)染非特異性siRNA組1.293±0.3120;(4)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅠ27.54±1.841;(5)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅡ57.65±11.02;(6)轉(zhuǎn)染特異性siRNAⅢ54.96±10.49?？梢娹D(zhuǎn)染特異性siRNA后細(xì)胞凋亡相關(guān)

5、抗體caspase3表達(dá)增加，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。WesternBlot檢測caspase3蛋白條帶各轉(zhuǎn)染組較對照組表達(dá)明顯增加。
　　結(jié)論：
　　利用RNA干擾抑制人滋養(yǎng)細(xì)胞中SHBG基因的表達(dá)，成功使SHBG表達(dá)減少，可誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡。
　　意義：
　　通過對人滋養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行siRNA的基因干擾，抑制人滋養(yǎng)細(xì)胞中SHBG基因表達(dá)，導(dǎo)致人滋養(yǎng)細(xì)胞過度凋亡。GDM時由于血中高胰島素水平抑制了絨毛滋