RNA干擾技術抑制SHBG基因表達對人滋養(yǎng)細胞凋亡的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：
　　培養(yǎng)人滋養(yǎng)細胞(HTR8-SVneo)，通過RNA干擾技術抑制性激素結合球蛋白(Sex hormone binding globulin，SHBG)基因表達，從而研究SHBG的生物學行為。
　　方法：
　　將人滋養(yǎng)細胞分成6組:(1)空白對照組(2)轉染脂質體組(3)轉染非特異性siRNA組(4)轉染特異性siRNAⅠ(5)轉染特異性siRNAⅡ(6)轉染特異性siRNAⅢ，于轉染24小時后采用Realti

2、me PCR及WesternBlot方法檢測各組滋養(yǎng)細胞中SHBG的表達。利用Hoechst33258染色法檢測細胞凋亡，RealtimePCR及Westernblot方法測定凋亡相關抗體caspase3 mRNA及蛋白的表達水平。采用SPSS軟件進行分析。
　　結果：
　　成功培養(yǎng)人滋養(yǎng)細胞，轉染24小時檢測SHBGmRNA表達量。結果如下:(1)空白對照組設為1;(2)轉染脂質體組0.9522＜±0.3065;(3)轉染

3、非特異性siRNA組1.881±0.5839;(4)轉染特異性siRNAⅠ0.1115±0.0379;(5)轉染特異性siRNAⅡ0.1817±0.1367;(6)轉染特異性siRNAⅢ0.1364±0.02845?？梢娹D染特異性siRNA后SHBG表達減少，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Western Blot檢測SHBG蛋白條帶各轉染組較對照組表達明顯降低。各組細胞于轉染24小時后進行Hoechst33258染色法檢測細胞凋亡

4、，熒光顯色后可見轉染組致密濃染顆粒較對照組明顯增加，RealtimePCR檢測caspase3 mRNA表達量結果如下:(1)空白對照組設為1;(2)轉染脂質體組1.004＜±0.1971;(3)轉染非特異性siRNA組1.293±0.3120;(4)轉染特異性siRNAⅠ27.54±1.841;(5)轉染特異性siRNAⅡ57.65±11.02;(6)轉染特異性siRNAⅢ54.96±10.49。可見轉染特異性siRNA后細胞凋亡相關

5、抗體caspase3表達增加，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。WesternBlot檢測caspase3蛋白條帶各轉染組較對照組表達明顯增加。
　　結論：
　　利用RNA干擾抑制人滋養(yǎng)細胞中SHBG基因的表達，成功使SHBG表達減少，可誘導滋養(yǎng)細胞凋亡。
　　意義：
　　通過對人滋養(yǎng)細胞進行siRNA的基因干擾，抑制人滋養(yǎng)細胞中SHBG基因表達，導致人滋養(yǎng)細胞過度凋亡。GDM時由于血中高胰島素水平抑制了絨毛滋

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