番茄LeARF8基因克隆及其時(shí)空表達(dá)特性的研究.pdf

1、番茄是世界上生產(chǎn)面積與總產(chǎn)量最高的蔬菜作物，同時(shí)也是我國南北各地廣泛栽培的夏秋季主要蔬菜。生長素在植物的生長和發(fā)育過程中起著關(guān)鍵的作用，開花前后外施生長調(diào)節(jié)劑，可以明顯增加胚珠的纖維數(shù)量并促進(jìn)子房膨大形成果實(shí)。ARF是生長素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的關(guān)鍵因子，它可以接受生長素傳遞的信號(hào)，啟動(dòng)或是抑制下游基因的表達(dá)。因此研究生長素反應(yīng)因子對(duì)番茄單性結(jié)實(shí)，改善果實(shí)品質(zhì)具有重要意義。 本試驗(yàn)主要研究番茄生長素反應(yīng)因子ARFs基因在坐果與果實(shí)發(fā)育

2、過程中的時(shí)空表達(dá)特性，同時(shí)探索了激素對(duì)番茄果實(shí)發(fā)育的影響及對(duì)ARFs基因表達(dá)的影響，揭示生長素與果實(shí)發(fā)育的關(guān)系，旨在探討生長素調(diào)控植物果實(shí)發(fā)育的分子機(jī)制，為在生產(chǎn)上解決番茄坐果不良等問題尋求重要理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： (1)通過同源克隆技術(shù)得到櫻桃番茄生長素反應(yīng)基因LeARF8-1序列，cDNA全長2538bp，NCBI信息中心比對(duì)顯示同源性達(dá)94％，具有典型的ARF基因結(jié)構(gòu)特征，進(jìn)化分析表明其屬于番茄ARF8基因家族。利

3、用TAIL-PCR技術(shù)，對(duì)其5'端上游啟動(dòng)子區(qū)域序列進(jìn)行克隆，得到了啟動(dòng)子區(qū)域的部分片段。 (2)RT-PCR分析4種ARF基因的時(shí)空表達(dá)特性，發(fā)現(xiàn)ARF8基因在‘中蔬6號(hào)’番茄的五個(gè)部位(莖、葉、開花前子房、開花后子房和果實(shí))中均有表達(dá)，在花后子房中的表達(dá)量較弱；ARF3基因在葉片和子房中幾乎沒有表達(dá)，在果實(shí)中的表達(dá)也相對(duì)較弱；ARF6基因同樣在番茄的葉片中近乎沒有表達(dá)，而在果實(shí)中的表達(dá)量較高，其余部位較弱。在果實(shí)發(fā)育的不同時(shí)

4、期，4個(gè)ARF基因都有表達(dá)，相對(duì)而言，ARF3表達(dá)量稍弱。 (3)高效液相色譜技術(shù)(HPlC)分析激素處理后番茄果實(shí)內(nèi)多胺、IAA和GA3含量的變化。結(jié)果表明：30 mg·L-1 2，4-D處理使腐胺含量顯著升高。亞精胺則在100 mg·L-1 GA3處理下的果實(shí)中含量最高，2，4-D處理的果實(shí)中精胺含量顯著地高于GA3處理的果實(shí)。高濃度的2，4-D和GA3處理下精胺含量顯著上升，顯著地高于非單性結(jié)實(shí)對(duì)照。高濃度的外源2，4-D