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文檔簡介
1、本研究從研究銀屑病皮損角質(zhì)形成細胞過度增殖、新生血管和炎癥細胞的浸潤角度,采用免疫組織化學、抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附和流失細胞分析儀等方法,檢測各類粘附分子和VEGF的表達。選擇血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)原代培養(yǎng)和角質(zhì)形成細胞的永生化細胞株HaCaT的基礎上,以MTT比色法研究伊曲替酸對HUVEC和HaCaT增殖的調(diào)控作用,并通過流式細胞技術檢測各個細胞周期的變化。依據(jù)中醫(yī)辨證論治自組復方中藥“七皮飲”治療銀屑病,采用抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附方
2、法,檢測治療前后γ-IFN和VCAM-1。結果如下: 采用免疫組織化學和抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附等方法,檢測銀屑病患者皮損組織和血清各類粘附分子和VEGF的表達,運用統(tǒng)計學手段分析實驗結果,獲得銀屑病皮損組織中檢測分子強弱排序為VCAM-1>PECAM-1>ICAM-1>VEGF>LFA-1>VLA-4>Mac-1。表明銀屑病皮損真皮乳頭毛細血管擴張、迂曲、通透性增加和血管內(nèi)皮細胞增生與細胞因子密切相關程度。PECAM-1,可以作為
3、銀屑病皮損真皮乳頭血管增生的敏感性標記。建立VCAM-1和ICAM-1判別診治銀屑病結果的敏感度和特異度實驗室指標。本實驗結果為治療銀屑病提供藥物的作用靶點;為臨床判別銀屑病發(fā)生、發(fā)展和轉歸的判別指標,及用于研究治療銀屑病藥物的藥理作用的判別指標。 采用免疫組織化學和流失細胞分析儀等方法,檢測到進行期銀屑病患者皮損CLA和E選擇素的表達均呈強陽性,而非皮區(qū)和正常皮膚表達微量。證明銀屑病皮損中有大量記憶的CLA+T細胞。檢測到進展
4、期銀屑病患者外周血中CLA+CD3+T、CLA+CD4+T和CLA+CD8+T細胞表達明顯高于正常人和靜止期患者。進一步表明進行期銀屑病患者血循環(huán)中,有大量被激活的記憶CLA+T細胞。這些記憶CLA+T細胞不斷定位向皮膚歸巢,引發(fā)一系列細胞免疫異常,最終導致銀屑病皮損發(fā)生。通過體外模擬感染刺激使記憶的CLA+T細胞增殖,更進一步證實CLA+T細胞是引起銀屑病發(fā)生和加重的重要途徑。選擇阻斷記憶CLA+T細胞定位向皮膚歸巢為藥物作用靶點,將
5、是開發(fā)治療銀屑病新藥的又一有效途徑。。 以MTT比色法和流式細胞技術檢測伊曲替酸對HUVEC和HaCaT增殖和細胞周期調(diào)控,結果發(fā)現(xiàn)伊曲替酸對內(nèi)皮細胞的調(diào)控為先增殖后抑制的趨勢,對角質(zhì)形成細胞株HaCaT是直接抑制的作用,其作用都與藥物濃度和作用時間相關。另外,伊曲替酸使內(nèi)皮細胞的周期阻滯于G1期,而HaCaT的周期被阻滯于S期,對細胞周期的影響同樣與藥物濃度和作用時間相關。 運用抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測復方中藥“七皮飲
6、”對銀屑病患者外周血中的γ—IFN和VCAM-1的含量表達的作用。結果表現(xiàn)減少其表達量。表明“七皮飲”不僅抑制表皮角質(zhì)形成細胞過度增殖,而且還可以抑制真皮微血管新生,降低血管的通透性。發(fā)現(xiàn)“七皮飲”具有抑制角質(zhì)形成細胞增殖增值率,使細胞阻滯在G1期。其中的地骨皮具有促進細胞增殖,而桑白皮則抑制細胞增殖,顯示了君藥二者的一促一抑,相生相克?!捌咂わ嫛奔幢憩F(xiàn)出抑制細胞的作用又不至于過分的抑制細胞的生長,從中西醫(yī)結合的角度達到治療的目的。進一
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