銀屑病細(xì)胞因子異常表達(dá)及相關(guān)藥物的研究.pdf

1、本研究從研究銀屑病皮損角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖、新生血管和炎癥細(xì)胞的浸潤角度，采用免疫組織化學(xué)、抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附和流失細(xì)胞分析儀等方法，檢測各類粘附分子和VEGF的表達(dá)。選擇血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)原代培養(yǎng)和角質(zhì)形成細(xì)胞的永生化細(xì)胞株HaCaT的基礎(chǔ)上，以MTT比色法研究伊曲替酸對HUVEC和HaCaT增殖的調(diào)控作用，并通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測各個細(xì)胞周期的變化。依據(jù)中醫(yī)辨證論治自組復(fù)方中藥“七皮飲”治療銀屑病，采用抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附方

2、法，檢測治療前后γ-IFN和VCAM-1。結(jié)果如下： 采用免疫組織化學(xué)和抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附等方法，檢測銀屑病患者皮損組織和血清各類粘附分子和VEGF的表達(dá)，運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)手段分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，獲得銀屑病皮損組織中檢測分子強(qiáng)弱排序?yàn)閂CAM-1＞PECAM-1＞ICAM-1＞VEGF＞LFA-1＞VLA-4＞Mac-1。表明銀屑病皮損真皮乳頭毛細(xì)血管擴(kuò)張、迂曲、通透性增加和血管內(nèi)皮細(xì)胞增生與細(xì)胞因子密切相關(guān)程度。PECAM-1，可以作為

3、銀屑病皮損真皮乳頭血管增生的敏感性標(biāo)記。建立VCAM-1和ICAM-1判別診治銀屑病結(jié)果的敏感度和特異度實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為治療銀屑病提供藥物的作用靶點(diǎn)；為臨床判別銀屑病發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的判別指標(biāo)，及用于研究治療銀屑病藥物的藥理作用的判別指標(biāo)。 采用免疫組織化學(xué)和流失細(xì)胞分析儀等方法，檢測到進(jìn)行期銀屑病患者皮損CLA和E選擇素的表達(dá)均呈強(qiáng)陽性，而非皮區(qū)和正常皮膚表達(dá)微量。證明銀屑病皮損中有大量記憶的CLA+T細(xì)胞。檢測到進(jìn)展

4、期銀屑病患者外周血中CLA+CD3+T、CLA+CD4+T和CLA+CD8+T細(xì)胞表達(dá)明顯高于正常人和靜止期患者。進(jìn)一步表明進(jìn)行期銀屑病患者血循環(huán)中，有大量被激活的記憶CLA+T細(xì)胞。這些記憶CLA+T細(xì)胞不斷定位向皮膚歸巢，引發(fā)一系列細(xì)胞免疫異常，最終導(dǎo)致銀屑病皮損發(fā)生。通過體外模擬感染刺激使記憶的CLA+T細(xì)胞增殖，更進(jìn)一步證實(shí)CLA+T細(xì)胞是引起銀屑病發(fā)生和加重的重要途徑。選擇阻斷記憶CLA+T細(xì)胞定位向皮膚歸巢為藥物作用靶點(diǎn)，將

5、是開發(fā)治療銀屑病新藥的又一有效途徑。。 以MTT比色法和流式細(xì)胞技術(shù)檢測伊曲替酸對HUVEC和HaCaT增殖和細(xì)胞周期調(diào)控，結(jié)果發(fā)現(xiàn)伊曲替酸對內(nèi)皮細(xì)胞的調(diào)控為先增殖后抑制的趨勢，對角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT是直接抑制的作用，其作用都與藥物濃度和作用時間相關(guān)。另外，伊曲替酸使內(nèi)皮細(xì)胞的周期阻滯于G1期，而HaCaT的周期被阻滯于S期，對細(xì)胞周期的影響同樣與藥物濃度和作用時間相關(guān)。 運(yùn)用抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測復(fù)方中藥“七皮飲

6、”對銀屑病患者外周血中的γ—IFN和VCAM-1的含量表達(dá)的作用。結(jié)果表現(xiàn)減少其表達(dá)量。表明“七皮飲”不僅抑制表皮角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖，而且還可以抑制真皮微血管新生，降低血管的通透性。發(fā)現(xiàn)“七皮飲”具有抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖增值率，使細(xì)胞阻滯在G1期。其中的地骨皮具有促進(jìn)細(xì)胞增殖，而桑白皮則抑制細(xì)胞增殖，顯示了君藥二者的一促一抑，相生相克。“七皮飲”即表現(xiàn)出抑制細(xì)胞的作用又不至于過分的抑制細(xì)胞的生長，從中西醫(yī)結(jié)合的角度達(dá)到治療的目的。進(jìn)一