銀屑病細胞因子異常表達及相關藥物的研究.pdf

1、本研究從研究銀屑病皮損角質(zhì)形成細胞過度增殖、新生血管和炎癥細胞的浸潤角度，采用免疫組織化學、抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附和流失細胞分析儀等方法，檢測各類粘附分子和VEGF的表達。選擇血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)原代培養(yǎng)和角質(zhì)形成細胞的永生化細胞株HaCaT的基礎上，以MTT比色法研究伊曲替酸對HUVEC和HaCaT增殖的調(diào)控作用，并通過流式細胞技術檢測各個細胞周期的變化。依據(jù)中醫(yī)辨證論治自組復方中藥“七皮飲”治療銀屑病，采用抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附方

2、法，檢測治療前后γ-IFN和VCAM-1。結果如下： 采用免疫組織化學和抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附等方法，檢測銀屑病患者皮損組織和血清各類粘附分子和VEGF的表達，運用統(tǒng)計學手段分析實驗結果，獲得銀屑病皮損組織中檢測分子強弱排序為VCAM-1＞PECAM-1＞ICAM-1＞VEGF＞LFA-1＞VLA-4＞Mac-1。表明銀屑病皮損真皮乳頭毛細血管擴張、迂曲、通透性增加和血管內(nèi)皮細胞增生與細胞因子密切相關程度。PECAM-1，可以作為

3、銀屑病皮損真皮乳頭血管增生的敏感性標記。建立VCAM-1和ICAM-1判別診治銀屑病結果的敏感度和特異度實驗室指標。本實驗結果為治療銀屑病提供藥物的作用靶點；為臨床判別銀屑病發(fā)生、發(fā)展和轉歸的判別指標，及用于研究治療銀屑病藥物的藥理作用的判別指標。 采用免疫組織化學和流失細胞分析儀等方法，檢測到進行期銀屑病患者皮損CLA和E選擇素的表達均呈強陽性，而非皮區(qū)和正常皮膚表達微量。證明銀屑病皮損中有大量記憶的CLA+T細胞。檢測到進展

4、期銀屑病患者外周血中CLA+CD3+T、CLA+CD4+T和CLA+CD8+T細胞表達明顯高于正常人和靜止期患者。進一步表明進行期銀屑病患者血循環(huán)中，有大量被激活的記憶CLA+T細胞。這些記憶CLA+T細胞不斷定位向皮膚歸巢，引發(fā)一系列細胞免疫異常，最終導致銀屑病皮損發(fā)生。通過體外模擬感染刺激使記憶的CLA+T細胞增殖，更進一步證實CLA+T細胞是引起銀屑病發(fā)生和加重的重要途徑。選擇阻斷記憶CLA+T細胞定位向皮膚歸巢為藥物作用靶點，將

5、是開發(fā)治療銀屑病新藥的又一有效途徑。。 以MTT比色法和流式細胞技術檢測伊曲替酸對HUVEC和HaCaT增殖和細胞周期調(diào)控，結果發(fā)現(xiàn)伊曲替酸對內(nèi)皮細胞的調(diào)控為先增殖后抑制的趨勢，對角質(zhì)形成細胞株HaCaT是直接抑制的作用，其作用都與藥物濃度和作用時間相關。另外，伊曲替酸使內(nèi)皮細胞的周期阻滯于G1期，而HaCaT的周期被阻滯于S期，對細胞周期的影響同樣與藥物濃度和作用時間相關。 運用抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測復方中藥“七皮飲

6、”對銀屑病患者外周血中的γ—IFN和VCAM-1的含量表達的作用。結果表現(xiàn)減少其表達量。表明“七皮飲”不僅抑制表皮角質(zhì)形成細胞過度增殖，而且還可以抑制真皮微血管新生，降低血管的通透性。發(fā)現(xiàn)“七皮飲”具有抑制角質(zhì)形成細胞增殖增值率，使細胞阻滯在G1期。其中的地骨皮具有促進細胞增殖，而桑白皮則抑制細胞增殖，顯示了君藥二者的一促一抑，相生相克?！捌咂わ嫛奔幢憩F(xiàn)出抑制細胞的作用又不至于過分的抑制細胞的生長，從中西醫(yī)結合的角度達到治療的目的。進一