PCNA、COX-2與宮頸鱗狀細胞癌微血管密度的關(guān)系研究.pdf

1、背景與目的；宮頸癌(cervical cancer)是全球女性中僅次于乳腺癌的最常見的惡性婦科腫瘤.患者高發(fā)年齡呈雙峰狀,35～39歲和60～64歲.據(jù)國際癌癥中心估計,每年新發(fā)病例約37萬,占所有腫瘤的9.8﹪,且年輕患者有上升趨勢.宮頸癌有較長的癌前病變階段,其病因尚未完全明了,國內(nèi)外資料認為其發(fā)病與過早性生活、性生活紊亂、早年分娩、密產(chǎn)多產(chǎn)、HPV感染、經(jīng)濟狀況等有關(guān). 腫瘤血管生成(tumor angiogenesis)

2、理論認為腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管生成,腫瘤細胞代謝產(chǎn)生的化學信號可激活處于休眠狀態(tài)的血管內(nèi)皮細胞從而促進腫瘤血管生成.實體腫瘤在沒有新生血管形成以前腫瘤只能夠長到1～3mm,不會發(fā)生轉(zhuǎn)移,在新生血管形成以后腫瘤會呈指數(shù)倍增長,轉(zhuǎn)移的機會隨之增加.而以直接蔓延作為主要轉(zhuǎn)移途徑的宮頸癌,其發(fā)生和轉(zhuǎn)移更依賴于新生血管的形成.近年來的研究表明,腫瘤血管生成與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可用于判斷預(yù)后和觀察療效. 微血管密度(micr

3、ovascular density,MVD)被公認為是反映腫瘤血管生成的最有效的客觀指標.CDl05(Endoglin)是新生血管內(nèi)皮細胞特異性標志物,僅在增殖活躍的血管內(nèi)皮細胞中強表達,比以往血管標記因子更具優(yōu)越性.增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是一種酸性核蛋白,為DNA聚合酶d的輔因子,主要在G1早期和S后期誘導DNA的合成,對DNA復(fù)制的調(diào)節(jié)起重要作用.環(huán)氧化酶.2

4、(cyclooxygenase-2,COX-2)是分解花生四烯酸(arachidonic acid,AA)生成各種內(nèi)源性前列腺素(prostaglandons,PGs)過程中重要的限速酶,它能引起炎癥反應(yīng)并通過多種機制促進腫瘤新生血管的生成.本實驗以免疫組化SP法檢測正常宮頸組織、癌前病變及宮頸鱗狀細胞癌中CD105、COX-2及PCNA的表達,旨在探討微血管密度及細胞增殖在宮頸鱗狀細胞癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及相互關(guān)系,為臨床合理選擇手術(shù)

5、方式及判斷預(yù)后、抗腫瘤治療新方法提供有價值指標及理論依據(jù). 材料與方法 1 實驗材料:宮頸標本共96例,其中正常宮頸組織32例,宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN) Ⅰ級7例,CIN Ⅱ級9例,CINⅢ級18例,宮頸鱗狀細胞癌共30例.所有取材的標本術(shù)前均未接受過放療及化療,各標本均經(jīng)病理證實.在30例宮頸鱗狀細胞癌中,年齡24～65歲,平均年齡43歲;臨床分期采

6、用國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(international federation of Gynecology andObstetrics,FIGO)2000年修訂的臨床分期標準,Ⅰ A期7例,Ⅰ B期11例,Ⅱ A期7例,Ⅱ B期5例;30例宮頸鱗狀細胞癌中26例做盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù),發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者5例. 2 實驗方法:應(yīng)用免疫組化SP染色法檢測CD105,PCNA,COX-2在宮頸鱗狀細胞癌及癌前病變和正常宮頸組織中的表達水平,計數(shù)CD1

7、05標記的陽性微血管數(shù)目,計算平均MVD值;以PCNA陽性細胞數(shù)計算增殖細胞指數(shù)(priliferation index.PI);圖象分析系統(tǒng)計算COX-2灰度值.所有數(shù)據(jù)資料均采用SPSS11-O軟件包進行統(tǒng)計分析.計量資料均以a=O.05為檢驗標準. 結(jié)果 1 CD105蛋白主要表達于新生血管的內(nèi)皮細胞胞膜或胞漿,呈棕黃色顆粒,被標記的陽性血管主要位于癌巢周圍的間質(zhì)組織. MVD在正常宮頸中為5.13±2.3

8、0,在CINI中為11.57±1.40,在CINⅡ中為11.44±3.54,在CINⅢ中為12.56±2.20,在宮頸鱗癌中為15.40±2.90;在宮頸鱗癌中,高分化為14.71±2.43,中分化為13.77±2.24,低分化為18.00±2.16,低分化與前兩種間差別有統(tǒng)計學意義;依據(jù)FIGO2000標準,Ⅰ期為14.17±2.68,Ⅱ期為17.25±2.18,差別具有統(tǒng)計學意義;在進行淋巴結(jié)清掃中發(fā)現(xiàn)有轉(zhuǎn)移者MVD為18.00±2

9、.35,無轉(zhuǎn)移者為15.10±2.76,差別具有統(tǒng)計學意義;以40歲將對象分為高低兩個年齡組,年輕組為16.64±2.20,年老組為14.68±3.06,其間差別不具有統(tǒng)計學意義. 2 PCNA主要表達于增殖期細胞的細胞核,將細胞核染為棕黃色,見于腫瘤細胞的胞核、不典型增生的細胞胞核及部分宮頸正常鱗狀上皮基底層處于增殖期的細胞胞核;在癌巢中呈彌漫性表達,表現(xiàn)為陽性細胞成團分布.PI值在正常宮頸中為4.97±2.65,在CINI中

10、為14.14±3.02,在CINII中為16.78±2.33,在CINIII中為31.22±3.61,在宮頸鱗狀細胞癌中為44.27±3.74;在宮頸鱗癌中,高分化為40.86±3.13,中分化為43.69±3.09,低分化為47.40±2.31,三者間差別有統(tǒng)計學意義;HGO I期為42.39±3.26,Ⅱ期為47.08±2.47,差別具有統(tǒng)計學意義;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為48.80±1.10,無轉(zhuǎn)移組為44.00±3.15,兩種間差別有統(tǒng)計

11、學意義:年輕組為45.36±2.94,年老組為43.63±4.07,兩者間差別不具有統(tǒng)計學意義. 3 COX-2蛋白陽性表達為細胞漿著色,陽性細胞主要是腫瘤細胞、不典型增生細胞及部分取活檢部位的炎癥反應(yīng)細胞.陽性細胞為棕黃色,著色深淺有差異. COX-2灰度值在正常宮頸中為104.90±1.72,在CINI中為115.05±2.75,在CIYlI中為115.42±3.03,在CINIII中為120.52±1.84,在宮頸

12、鱗狀細胞癌中為132.79±2.24;在宮頸鱗癌病理分級中,高分化為130.16±1.65,中分化133.22±1.36,低分化134.08±2.11,高分化與中、低分化間差別有統(tǒng)計學意義,但中、低分化間差別無意義;FIGO I期中為132.23±1.79和Ⅱ期中133.62±2.66間的差別不具有統(tǒng)計學意義;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為135.70±1.60和無轉(zhuǎn)移組132.30±1.84間差別具有統(tǒng)計學意義;年輕組134.06±2.01與年老組1

13、32.06±2.08間差別具有統(tǒng)計學意義. 結(jié)論；1 cb105標記的MVD與宮頸鱗狀細胞癌的病理分級及FIGO臨床分期密切相關(guān),說明血管生成與宮頸鱗狀細胞癌的惡性程度及病變范圍有關(guān),印證了腫瘤血管生成理論.MVD與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移亦有關(guān),說明血管生成促進了宮頸鱗狀細胞癌體積增大,符合宮頸癌直接蔓延的轉(zhuǎn)移途徑,并且容易使與宮頸鱗狀細胞癌浸潤淋巴管,形成瘤栓,隨淋巴液引流到達局部淋巴結(jié). 2 PCNA標記的PI在正常宮頸、C

14、IN各級及宮頸鱗狀細胞癌中的表達差異具有顯著性.PCNA的表達與宮頸鱗狀細胞癌的病理分級、FIGO分期密切相關(guān),并與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān),說明宮頸鱗狀細胞癌的增殖能力越強,惡性程度越高,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力就越強,可作為宮頸鱗狀細胞癌的早期診斷指標. 3 COX-2在正常宮頸、CIN各級及宮頸鱗狀細胞癌中的表達差異具有顯著性.COX-2在不同HGO分期的宮頸鱗狀細胞癌患者中的表達無明顯差異,與宮頸鱗狀細胞癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡及病理分級

15、呈正相關(guān).在宮頸鱗狀細胞癌中,COX-2的表達與患者年齡有關(guān),可能是年輕患者相對性生活比較活躍,有較多患者合并慢性宮頸炎,致使COX-2在年輕患者中表達較高.4 CD105、PCNA及COX-2在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗狀細胞癌中的表達有顯著性差異,并且三者的表達呈正相關(guān);提示三者在誘導機制上存在關(guān)聯(lián),協(xié)同促進宮頸鱗狀細胞癌的發(fā)生與發(fā)展.聯(lián)合檢測宮頸鱗狀細胞癌中的MVD及PCNA值,有助于了解宮頸鱗狀細胞癌細胞的生物學行