HER-2對胃癌細胞浸潤和轉移的影響及其機制的研究.pdf

1、胃癌是一嚴重危害著全世界人民健康的惡性腫瘤，在全球范圍內占所有癌癥的7.8％，居全球腫瘤發(fā)病率及病死率的第2位，我國也是胃癌高發(fā)區(qū)。由于胃癌早期缺乏典型的臨床表現(xiàn)，多數(shù)患者在確診時已處于進展期，甚至已發(fā)生轉移，預后較差。浸潤轉移是胃癌主要的致死性原因，因此探明其浸潤轉移機制，為發(fā)展新的治療策略提供有力的理論依據(jù)而顯得尤為迫切和重要。
　　 HER-2又稱neu、ErbB-2、C-erbB-2或P185，是具有酪氨酸蛋白激酶活性的

2、跨膜糖蛋白，為EGFRs家族的一員，通常只在胎兒時期表達，成年后只出現(xiàn)在少數(shù)正常組織中。在正常情況下，HER-2表達非常低，可參與細胞生長、增殖和分化的調節(jié)。當受到某些致癌因素作用后，其結構或表達失控而被激活，促使細胞發(fā)生惡性轉化，并加速腫瘤細胞運動，導致腫瘤的浸潤及轉移。多數(shù)研究發(fā)現(xiàn)，HER-2在胃癌中存在過表達或基因擴增現(xiàn)象，影響胃癌患者的預后，也可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤、淋巴結轉移及胃癌肝轉移過程。
　　 人類Fa

3、scin1基因屬于Fascin家族，編碼產物為分子量55KD、是能與F-肌動蛋白結合的細胞骨架蛋白，定位于細胞質張力纖維和細胞膜皺褶(ruffles)邊緣的絲狀偽足、微棘(microspikes)的核心肌動蛋白束中，而細胞形成的偽足和微棘與細胞運動、癌細胞的侵襲與轉移等密切相關。Fascin1蛋白在正常神經組織中表達，而在上皮細胞中不表達或低表達，近年來的研究發(fā)現(xiàn)在一些上皮組織腫瘤如乳腺癌、胰腺癌和卵巢癌等中常表達上調，盡管在胃癌患者中

4、Fascin1表達率不高（25％），但它的表達與胃癌的浸潤、淋巴結轉移、TNM分期和復發(fā)密切相關。
　　 Twist屬于堿性的螺旋-環(huán)-螺旋（Basichelix loop helix，bHLH)蛋白家族中的高度保守的轉錄因子，其蛋白分子量為26 kD，在胎盤和中胚層來源的組織和細胞中呈高表達，廣泛參與調控器官生長發(fā)育、腫瘤發(fā)生、細胞增殖分化等過程。最近Twist被認為是癌基因蛋白，影響腫瘤細胞的凋亡，并作為上皮-間質轉型(ep

5、ithel ial-mesenchymaltransition，EMT)過程中的關鍵調控因子，對腫瘤的侵襲和轉移有重要影響。近幾年研究表明Twist與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期以及遠處轉移明顯相關。
　　 目的:研究HER-2基因對胃癌細胞侵襲和轉移特性的影響，探討HER-2基因與促腫瘤浸潤和轉移分子如Fascin1和Twist的相互關系，為HER-2作為靶的胃癌基因治療提供理論基礎和實驗依據(jù)。
　　

6、 方法:
　　 1.培養(yǎng)胃癌細胞SGC7901、BGC823、MKN45。
　　 2.利用脂質體介導轉染技術，分別轉染質粒HER-2(CA)，HER-2(KD)，HER-2(WT)和空白質粒載體(PCDNA3)到MKN45細胞和SGC7901細胞，以空白質粒載體轉染組為陰性對照，以空白轉染組（本底細胞）為空白對照。
　　 3.利用脂質體介導轉染技術，分別轉染干擾質粒Neu-shRNA，Control-shRNA

7、于BGC823細胞，以空白質粒載體轉染組為陰性對照，以空白轉染組（本底細胞）為空白對照。
　　 4.逆轉錄聚合酶鏈反應（Real-time PCR）法檢測不同轉染組SGC7901細胞，MKN45細胞，BGC823細胞的HER-2和Fascin1的mRNA水平，并分析HER-2和Fascin1的相關性。
　　 5.用Western blotting的方法比較不同轉染組SGC7901細胞，MKN45細胞，BGC823細胞HE

8、R-2，F(xiàn)ascin1，Twist和E-cadherin的蛋白表達，并分其相關性。
　　 6.用Transwell侵襲小室，Transwell遷移實驗和細胞劃痕實驗:檢測轉染HER-2(CA), HER-2(WT)質粒后MKN45細胞侵襲遷移能力變化;檢測轉染Neu-shRNA, Control-shRNA質粒后BGC823細胞侵襲遷移能力變化。
　　 結果:
　　 1.與空白質粒轉染對照組（Control-sh

9、RNA-BGC823）和未轉染組BGC823細胞相比，在干擾質粒轉染組（Neu-shRNA-BGC823）細胞中，HER-2和Twist表達下調(P＜0.05), E-cadherin表達上調(P＜0.05)，F(xiàn)ascin1表達無變化(P＞0.05)。
　　 2.與空白質粒轉染對照組PCDNA3-MKN45和未轉染組MKN45細胞相比，在質粒（HER-2CA，HER-2KD，HER-2WT）轉染組HER-2-MKN45細胞中，H

10、ER-2和Twist表達上調(P＜0.05)，E-cadherin表達下調(P＜0.05)，F(xiàn)ascin1表達無變化(P＞0.05)，同時在另外一株胃癌細胞株SGC7901中得到相同的結論。
　　 3.與空白質粒轉染對照組(Control-shRNA-BGC823)和未轉染組BGC823細胞相比，干擾質粒轉染組(Neu-shRNA-BGC823)細胞的遷移能力和侵襲能力明顯降低(P＜0.05);劃痕實驗結果也表明，干擾質粒轉染組

11、細胞的愈合能力明顯減弱(P＜0.05)。
　　 4.與空白質粒轉染對照組PCDNA3-MKN45和未轉染組MKN45細胞相比，質粒(HER-2CA，HER-2WT)轉染組HER-2-MKN45細胞遷移能力和侵襲能力明顯增加(P＜0.05);劃痕實驗結果也表明，HER-2質粒轉染組細胞的愈合能力明顯增強(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.HER-2增強胃癌細胞的侵襲和遷移能力。
　　 2.HER-2