食管癌高危人群食管上皮內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤與上皮增生關(guān)系及HPV感染的初步研究.pdf

1、背景與目的:
　　南部沿海潮汕地區(qū)和內(nèi)陸太行山區(qū)是中國兩大食管癌高發(fā)區(qū)。其中近十年潮汕地區(qū)南澳島食管癌賁門癌的發(fā)病率為109.5/10萬[1],太行山區(qū)林州市1995-2004年食管癌發(fā)病率為83.2/10萬[2]。本課題組前期通過遺傳流行病學(xué)調(diào)查、分子遺傳學(xué)等研究發(fā)現(xiàn)潮汕人群與內(nèi)陸太行山人群具有密切的血緣關(guān)系。本課題組已經(jīng)對潮汕地區(qū)食管慢性炎癥與食管癌關(guān)系進(jìn)行了研究,但標(biāo)本限于食管癌手術(shù)后組織,炎癥與腫瘤的因果關(guān)系仍存在爭議。2

2、005年10月本課題組有幸協(xié)助參與太行山區(qū)林州市食管癌普查工作,借此機(jī)會對此地高危人群的食管上皮內(nèi)炎細(xì)胞浸潤與上皮增生的關(guān)系進(jìn)行初步研究。
　　慢性食管炎為食管癌高發(fā)區(qū)高危人群中常見的食管疾病。有研究發(fā)現(xiàn)高發(fā)區(qū)人群的慢性食管炎的患病率明顯高于低發(fā)區(qū)。在伴有食管炎的人群中,食管上皮的單純性增生和非典型增生更為常見。本課題組通過對慢性炎癥和基底膜關(guān)系的研究,發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞與基底膜損傷以及上皮的增殖存在一定的關(guān)系,通過對人類白細(xì)胞分化抗原

3、的免疫組化檢測,證實(shí)食管粘膜上皮內(nèi)浸潤的淋巴細(xì)胞主要為T淋巴細(xì)胞。
　　HLA-DR為HLA-II類分子DR抗原,在免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)機(jī)制中起重要作用。HLA-DR主要存在于活化的T細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、B細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞,外周血淋巴細(xì)胞HLA-DR表達(dá)的程度可以反映T細(xì)胞的活化狀態(tài)。食管炎癥與食管腫瘤的關(guān)系的研究多集中于Barret’s食管和食管腺癌以及腫瘤免疫方面。食管炎癥細(xì)胞浸潤與食管增生或鱗癌的關(guān)系較少有人關(guān)注。
　

4、　自1982年,Syijanen提出HPV與食管癌的發(fā)生有關(guān)以來,許多研究認(rèn)為HPV可能與某些高發(fā)區(qū)的食管癌的發(fā)生有關(guān),但是檢出率差異較大。而且在食管癌組織、癌旁粘膜組織和正常組織中,HPV的感染情況有所不同。
　　本實(shí)驗旨在觀察食管上皮內(nèi)浸潤的炎癥細(xì)胞數(shù)目與上皮增生程度的關(guān)系,并以CD3和HLA-DR作為觀察指標(biāo),初步研究T細(xì)胞以及活化的T細(xì)胞對上皮增生的作用。通過免疫組化和DNA分子原位雜交兩種方法,初步檢測食管癌高危人群的食

5、管上皮的HPV感染情況。
　　材料與方法:
　　標(biāo)本來源
　　本課題組于2005.10月~2005.12月參與并協(xié)助河南省林州市腫瘤醫(yī)院開展的食管癌高危人群內(nèi)鏡普查工作。利用內(nèi)鏡獲取1480例食管上皮活檢標(biāo)本。高危人群來自林州市合澗鄉(xiāng)自愿接受普查的1480例無明顯癥狀的常住居民。年齡在40-70之間,男性558例,女性922例。
　　標(biāo)本取材步驟:纖維胃鏡自上而下檢查食管至胃十二指腸,對賁門或胃內(nèi)可疑病變部位鉗取

6、病變組織,然后碘染法使食管著色,針對染色可疑處多點(diǎn)鉗取食管組織。
　　研究方法:
　　1.對1480例食管上皮組織進(jìn)行石蠟包埋和H.E染色、病理學(xué)診斷;分析其病變特點(diǎn)。
　　選取301例食管上皮(正常140例,單純增生80例,非典型增生80例),重點(diǎn)觀察每例樣本中浸潤上皮內(nèi)的炎癥細(xì)胞數(shù)目與上皮增生之間的關(guān)系。
　　2.采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法分別對炎癥細(xì)胞的CD3、HLA-DR表達(dá)進(jìn)行檢測;

7、　　分別進(jìn)行浸潤上皮內(nèi)的CD3、HLA-DR陽性細(xì)胞計數(shù)。觀察T淋巴細(xì)胞浸潤數(shù)量以及其活化情況與上皮增生之間的關(guān)系。
　　3.采用免疫組織化學(xué)EnVision二步法對HPV衣殼蛋白進(jìn)行染色;利用HPV廣譜型DNA分子探針,采用DNA原位分子雜交方法對組織HPV感染情況進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果:
　　1.在1480例食管上皮中,正常上皮為911例(61.55％),明顯的炎癥76例(5.14%),單純增生96例(6.49%),

8、輕度非典型增生329例(22.23%),中度非典型增生39例(2.64%),重度非典型增生上皮17例(1.15%),癌7例(0.47%)。隨著年齡升高,炎癥、非典型增生以及癌癥的發(fā)生率逐漸增高(p<0.05)。
　　上皮內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤數(shù)目在單純增生和非典型增生上皮中均明顯高于正常上皮(p<0.05)。
　　炎癥細(xì)胞數(shù)>10(具有炎癥趨勢)的比例在正常、單純增生和各級非典型增生中的分布呈逐漸升高的趨勢,且在重度非典型增生上皮中

9、比例最高。
　　2.與正常食管上皮比較,單純增生和非典型增生上皮內(nèi)浸潤的CD3+T細(xì)胞數(shù)量均增多。且其差異有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。
　　上皮內(nèi)HLA-DR標(biāo)記的炎癥細(xì)胞數(shù)目與CD3標(biāo)記炎癥細(xì)胞數(shù)目成正相關(guān)(p<0.05)。與HLA-DR表達(dá)陰性的上皮相比,HLA-DR表達(dá)陽性的食管上皮中浸潤的CD3+細(xì)胞數(shù)目明顯增多(p<0.05)。
　　上皮內(nèi)浸潤HLA-DR+炎癥細(xì)胞數(shù)目在非典型增生中較正常升高,其差異

10、有統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　3.在228例食管上皮中未見明顯的HPV衣殼蛋白陽性表達(dá)。
　　在228例食管上皮中,75例檢測到HPV DNA,HPV陽性率為32.9%(75/228)。
　　結(jié)論:
　　1.在內(nèi)鏡普查中,非典型增生上皮和鱗狀細(xì)胞癌檢出率提示了其對于高發(fā)區(qū)食管癌的早防早治具有一定的積極意義。
　　食管癌高危人群食管粘膜上皮炎癥、上皮非典型增生以及癌的檢出率隨著年齡的增長逐漸增高。

11、>　　食管癌高危人群食管上皮內(nèi)浸潤炎癥細(xì)胞的數(shù)目與食管上皮的增生程度有較為密切的聯(lián)系。
　　2.上皮內(nèi)浸潤的T細(xì)胞數(shù)目與上皮的增生程度有明顯的關(guān)系;T細(xì)胞可能在上皮增生過程中起著一定的作用。
　　HLA-DR標(biāo)記的活性T細(xì)胞的數(shù)目與CD3+T細(xì)胞數(shù)目呈正相關(guān)。
　　HLA-DR標(biāo)記的活性T細(xì)胞在上皮從正常到非典型增生的轉(zhuǎn)變過程中起著一定的作用。
　　3.在高發(fā)區(qū)228例食管上皮石蠟組織中的HPV檢測中,HPVDN