基于細(xì)胞藥效毒效的雷公藤多苷片譜效關(guān)系研究.pdf

1、雷公藤多苷片是由雷公藤的干燥根提取、純化制得的，具有良好的抗炎、免疫抑制的藥理作用，臨床上廣泛用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、腎病綜合征等疾病，療效確切。但臨床不良反應(yīng)高發(fā)，且臨床應(yīng)用表明不同廠家的雷公藤多苷片藥效和毒副反應(yīng)有較大差異。由于雷公藤化學(xué)成分復(fù)雜，多個(gè)成分既為有效成分又為毒性成分，而目前多僅對(duì)雷公藤甲素（雷公藤內(nèi)酯醇）或雷公藤內(nèi)酯甲進(jìn)行含量控制，無法全面的對(duì)雷公藤多苷片的藥效和毒性進(jìn)行控制。明確藥效成分和毒性成分，建立全面科學(xué)、符合中

2、藥制劑整體起效特點(diǎn)的質(zhì)量控制方法，是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。本文擬通過體外實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)不同廠家的藥效及毒效差異，結(jié)合雷公藤多苷片高效液相指紋圖譜，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法建立雷公藤多苷片藥效、毒效數(shù)據(jù)與高效液相指紋圖譜色譜峰之間的相互關(guān)系，篩選出主要藥效成分和毒性成分，為尋找科學(xué)合理的藥效評(píng)價(jià)指標(biāo)、質(zhì)控指標(biāo)以及為臨床合理用藥提供科學(xué)依據(jù)。
　　本課題采用高效液相色譜分析法，選擇7個(gè)不同廠家雷公藤多苷片，建立高效液相指紋圖譜，共計(jì)篩選出18個(gè)特征

3、色譜峰。對(duì)7個(gè)廠家樣品指紋圖譜中18個(gè)特征峰峰面積進(jìn)行相似度分析、聚類分析、主成分分析，得到第5、6、7、9、10、15、18號(hào)峰是區(qū)分7個(gè)廠家雷公藤多苷片的主要特征峰。
　　采用LPS刺激的小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞炎癥模型考察不同廠家雷公藤多苷片抗炎藥效，以細(xì)胞增殖抑制IC50、TNF-α和IL-6含量為指標(biāo)，分析抗炎藥效與雷公藤指紋圖譜的譜效關(guān)系。發(fā)現(xiàn)以細(xì)胞增殖抑制IC50為指標(biāo)時(shí)，第1、2、6、7、8、17、18

4、號(hào)峰是主要藥效峰;以TNF-α抑制率為指標(biāo)時(shí)，第1、3、5、6、7、13、15、18號(hào)峰是主要藥效峰;以IL-6抑制率為指標(biāo)時(shí)，第3、4、5、9、10、11、14、15、16號(hào)峰是主要藥效峰。
　　采用Con A刺激的小鼠脾細(xì)胞模型考察雷公藤多苷片免疫抑制藥效，以細(xì)胞增殖抑制IC50、細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2含量為指標(biāo)，分析免疫抑制藥效與雷公藤指紋圖譜的譜效關(guān)系。發(fā)現(xiàn)以細(xì)胞增殖抑制IC50為指標(biāo)時(shí)，第1、2、6、7、17、18

5、號(hào)峰是主要藥效峰;以IFN-γ抑制率為指標(biāo)時(shí)，第1、2、6、7、8、9、12、13號(hào)峰是主要藥效峰;以IL-2抑制率為指標(biāo)時(shí)，第1、2、6、7、8、13、17、18號(hào)峰是主要藥效峰。
　　體外毒效試驗(yàn)選擇大鼠肝細(xì)胞、小鼠腎小球系膜細(xì)胞、大鼠心肌細(xì)胞分別考察雷公藤的肝、腎、心臟體外細(xì)胞毒性，以細(xì)胞增殖抑制IC50為指標(biāo)，分析毒效與雷公藤指紋圖譜的譜效關(guān)系，得出在肝細(xì)胞毒性方面:第1、2、8、9、12、13號(hào)峰是主要毒效峰;在腎細(xì)胞毒

6、性方面:第1、2、6、7、17、18號(hào)峰是主要毒效峰;在心臟細(xì)胞毒性方面:第6、7、13、17號(hào)峰是主要毒效峰。綜合3個(gè)方面的毒性數(shù)據(jù)，得出A廠家體外肝、腎、心臟毒性較大，D廠家對(duì)肝細(xì)胞毒性最弱，F(xiàn)廠家對(duì)腎小球系膜細(xì)胞毒性最弱，E廠家對(duì)心肌細(xì)胞毒性最弱。
　　綜合藥效與毒效試驗(yàn)結(jié)果，得出:A廠家抗炎、免疫抑制藥效最好，但毒性也最強(qiáng);B廠家抗炎藥效較弱，腎細(xì)胞毒性較小，肝細(xì)胞毒性和心臟細(xì)胞毒性卻較大;G廠家免疫抑制藥效較弱，毒性中等