2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)和阿霉素(doxorubicin,DOX)是最具代表性的兩種化療藥物,因其特有的藥物作用機(jī)制,它們被廣泛應(yīng)用于多種實(shí)體瘤的聯(lián)合化療中。然而,應(yīng)用游離體形式聯(lián)合化療仍存在腫瘤抑制率低、毒副反應(yīng)重、易誘發(fā)多藥耐藥的弊端。同時(shí),PTX與DOX都具有難溶于水的性質(zhì),從而導(dǎo)致藥物配置過(guò)程繁瑣、藥物輸注過(guò)程復(fù)雜。
  納米脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)(nanostructured lipid carrier, NLC)

2、制備技術(shù)成熟、藥物性能穩(wěn)定,現(xiàn)有的抗腫瘤藥物納米脂質(zhì)體展現(xiàn)出較好的藥物穩(wěn)定性、較好的藥物控釋能力、較輕的藥物毒副反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn),因此,納米脂質(zhì)體是制備二者共載系統(tǒng)的理想載體。
  本研究通過(guò)熔融乳化技術(shù),首次成功制備PTX-DOX共載納米脂質(zhì)體;在體外檢測(cè)了該脂質(zhì)體對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCL-H460的抑瘤能力;并通過(guò)構(gòu)建的NCL-H460荷瘤裸鼠模型,評(píng)價(jià)了PTX、DOX共載納米脂質(zhì)體的體內(nèi)抗癌效果。
  第一部分 PTX-

3、DOX共載納米脂質(zhì)體的制備
  目的:
  納米脂質(zhì)體的組成和結(jié)構(gòu)使其具有廣泛的藥物包容性,從小分子化學(xué)藥物到生物大分子都可以通過(guò)脂質(zhì)體來(lái)控制釋放。藥物經(jīng)脂質(zhì)體包封后,其動(dòng)力學(xué)發(fā)生了很大的變化,藥物在血液循環(huán)中的半衰期延長(zhǎng),藥物的毒副反應(yīng)降低,藥物溶解性得到了提高。納米脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)與生物膜的結(jié)構(gòu)相同,可以通過(guò)多種途徑進(jìn)入血液循環(huán),可以增加藥物制劑的靶向性,能夠減少治療劑量。本部分研究旨在建立一種兩藥聯(lián)合共載納米脂質(zhì)體,共同載

4、藥PTX和DOX。這種藥物共載體系,最大化的發(fā)揮聯(lián)合化療的優(yōu)點(diǎn),最小化減輕聯(lián)合化療的缺點(diǎn),解決單獨(dú)用藥易出現(xiàn)的多藥耐藥性問(wèn)題,特異性靶向殺傷腫瘤細(xì)胞,減輕對(duì)正常細(xì)胞和組織的損傷。
  方法:
  本研究采用熔融乳化技術(shù)制備PTX-DOX共載納米脂質(zhì)體。納米粒徑分析儀分析其粒徑、粒徑分布、表面電荷數(shù)及多分散指數(shù)(polydispersityindex,PDI),采用紫外分光光度法于480 nm處分析微球中DOX的含量,采用高效

5、液相色譜法分析微球中PTX含量;采用透析法測(cè)定PTX-DOX共載納米脂質(zhì)體的體外釋藥特征。
  結(jié)果:
  本研究中制備的納米脂質(zhì)體經(jīng)過(guò)測(cè)定,空白NLC及載藥NLC的粒徑均介于125~130 nm之間,PDI值為0.18,表明所制備的脂質(zhì)體具有良好的分散性。Zata電位+27 mV說(shuō)明PTX-DOX-NLC穩(wěn)定性較高,NLC易靶向轉(zhuǎn)運(yùn)至癌細(xì)胞。PTX-DOX-NLC的載藥量與載藥率相比于PTX-NLC、DOX-NLC均有輕微

6、下降,但下降幅度不大。結(jié)合粒徑及Zata電位的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,說(shuō)明即使載藥量與載藥率輕微下降,但該納米脂質(zhì)體的穩(wěn)定性未受影響。PTX-DOX-NLC體外釋藥過(guò)程符合Higuchi線(xiàn)性方程,藥物釋放呈現(xiàn)持續(xù)而緩慢的釋放,PTX以及DOX在24h內(nèi)釋放率可達(dá)70%以上。對(duì)比PTX-DOX-NLC、PTX-NLC和DOX-NLC三種納米脂質(zhì)體藥物體外釋放曲線(xiàn),發(fā)現(xiàn)三者藥物釋放速率基本相當(dāng),PTX-DOX-NLC中PTX和DOX都于48 h內(nèi)緩慢釋放

7、,表明PTX-DOX-NLC具有緩釋PTX和DOX的能力。
  結(jié)論:
  本研究通過(guò)熔融乳化技術(shù)成功制備共同載有PTX-DOX的納米脂質(zhì)體,空白NLC及載藥NLC的粒徑均介于125~130nm之間,說(shuō)明包封PTX與DOX并未影響納米脂質(zhì)體的粒徑。PTX-DOX-NLC的載藥量與載藥率相比于PTX-NLC、DOX-NLC有輕微下降,但該納米脂質(zhì)體的穩(wěn)定性未受影響。PTX-DOX-NLC體外釋藥過(guò)程符合Higuchi線(xiàn)性方程,

8、PTX-DOX-NLC具有緩釋PTX和DOX的能力。
  第二部分 PTX-DOX-NLC的體外抗腫瘤活性研究
  目的:
  藥物對(duì)人癌細(xì)胞的破壞作用即細(xì)胞毒性試驗(yàn),細(xì)胞毒性是由細(xì)胞或者化學(xué)物質(zhì)引起的細(xì)胞殺傷事件,它不依賴(lài)于凋亡或壞死的細(xì)胞死亡機(jī)理。細(xì)胞毒性檢測(cè)主要是根據(jù)細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變來(lái)進(jìn)行,最常用的方法是MTT比色法。本部分研究利用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)際評(píng)價(jià)PTX-DOX-NLC對(duì)

9、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCL-H460的抗腫瘤活性。
  方法:
  MTT比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法,其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法被常規(guī)應(yīng)用于細(xì)胞毒性試

10、驗(yàn)。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。本研究中應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率,采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0處理數(shù)據(jù),計(jì)算IC50,對(duì)比不同濃度藥物下細(xì)胞增殖抑制率,探索藥物作用模式、最佳劑量和細(xì)胞毒性。同樣方法測(cè)定PTX/DOX不同比例聯(lián)合載藥的PTX-DOX-NLC抑制腫瘤細(xì)胞增殖活性,從而篩選最佳的聯(lián)合載藥比例。
  結(jié)果:
  用載藥NLC或游離藥物處理48h的NCL-H460細(xì)胞,其存活率呈劑量依賴(lài)性降低,且以脂質(zhì)體形式聯(lián)合

11、給藥PTX-DOX對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的抑制效果最佳。與其他比例相比,PTX-DOX-NLC中的PTX/DOX值為1/1時(shí),IC50最低,因此可確定為最佳比例。脂質(zhì)體給藥的細(xì)胞毒性要大于游離形式,約為其2~3倍,而PTX-DOX-NLC的細(xì)胞毒性更強(qiáng),高于載單一藥物NLC(3倍)及游離藥物(9倍)(P<0.05)。
  結(jié)論:
  采用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率,對(duì)比PTX-DOX-NLC、PTX-NLC、DOX-NLC、游離P

12、TX、游離DOX不同濃度處理NCL-H460,結(jié)果表明用載藥NLC或游離藥物處理48h的NCL-H460細(xì)胞,其存活率呈劑量依賴(lài)性降低,且以脂質(zhì)體形式聯(lián)合給藥PTX-DOX對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的抑制效果最佳。本研究以抑制細(xì)胞增殖活性IC50為參數(shù),采用不同的聯(lián)合載藥比例,從而篩選出了最佳的聯(lián)合載藥比例:PTX-DOX-NLC中的PTX/DOX值為1/1時(shí),IC50最低,因此確定1/1為最佳比例。PTX-DOX-NLC的細(xì)胞毒性高于載單一

13、藥物NLC及游離藥物(P<0.05),說(shuō)明PTX-DOX-NLC抗腫瘤作用靶向性最明確。
  第三部分 PTX-DOX-NLC對(duì)NCL-H460荷瘤裸鼠的抗腫瘤研究
  目的:
  SPF級(jí)BALB/c(5-6周齡,體重約為18-22 g)裸鼠被廣泛應(yīng)用于腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、毒理學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的研究。通過(guò)建立人非小細(xì)胞肺癌株NCL-H460荷瘤裸鼠模型,比較聯(lián)合載藥納米脂質(zhì)體與游離藥物的體內(nèi)抑瘤效果。
  方

14、法:
  皮下注射法建立NCL-H460荷瘤裸鼠模型,動(dòng)態(tài)觀(guān)察裸鼠腫瘤生長(zhǎng)及食欲活動(dòng)變化等情況。繪制連續(xù)給藥21天腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn);對(duì)比不同給藥形式腫瘤生長(zhǎng)抑制率。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用mean±SD表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所得樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。首先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn),兩組間比較采用t檢驗(yàn),多組間比較采用單因素方差分析,P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
  結(jié)果:
  NLC制劑組的抑瘤效果顯著優(yōu)于游離藥物組。PTX-

15、DOX-NLC具有最高抑瘤率為84%,其次DOX-NLC抑瘤率為65%,PTX-NLC抑瘤率為64%,游離DOX和PTX抑瘤率為26%。PTX-DOX-NLC、PTX-NLC、DOX-NLC均可顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)(P<0.05),且PTX-DOX-NLC效果最好。給予NLC制劑處理的三組小鼠,體重均未有明顯的變化,但游離藥物給藥組及陰性對(duì)照組小鼠均出現(xiàn)了體重的明顯下降,并伴隨進(jìn)食量減少、活動(dòng)量減少。
  結(jié)論:
  對(duì)NCL

16、-H460荷瘤裸鼠模型分組注射PTX-DOX-NLC,PTX-NLC,DOX-NLC,游離PTX,游離DOX和0.9%生理鹽水(NS),得到腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PTX-DOX-NLC,PTX-NLC和DOX-NLC制劑均可顯著抑制腫瘤的生長(zhǎng)(P<0.05),且PTX-DOX-NLC效果最好。NLC制劑組的抑瘤效果顯著優(yōu)于游離藥物組。對(duì)不同給藥組進(jìn)行腫瘤抑制率的分析,結(jié)果為PTX-DOX-NLC具有最高抑瘤率為84%,其次為DOX-

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